非变性法蛋白沉淀试剂盒10 次二：细胞裂解
5. 如果用本产品 A 型，用 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液（1 mL 1×PBS 缓冲液+50 uL 溶液 A+ 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液）重悬细菌沉淀，冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索，一般选 1K-10K 频率处理 15 次，每次20 秒，间隔 1 分钟（必需放置在冰上）。裂解物不能粘稠，否则会堵塞
层析柱。
6. 如果用本产品 B 型，在 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液（在 20 mL1×PBS 缓冲液中加入所有 30 mg 溶菌酶干粉，溶解后分装成 1 mL/管，取一管使用，剩余的-20℃放置）中加入 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液和 1 uL Benzonase，用此混合液重悬细菌沉淀后冰上放置 30 分钟，得到细菌裂解物。
7. 将超声或酶法细胞裂解物在 13000 g 4℃离心 10 分钟去除未裂解细胞和裂解细胞碎片以防堵柱，所得上清即含可溶性 GST 标记蛋白。
三：层析柱的制备和 GST 蛋白纯化
8. 摇晃将谷胱甘肽-Agarose 介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 GST 蛋白产量决定，100 mL 菌液一般使用 200 uL 介质即可）。下列步骤各溶液的用量均针对 200 uL 介质而定，如果介质用量不同，各溶液用量需相应调整。
9. 用 5 mL 预冷的 1×PBS 缓冲液洗柱。
10.将第 7 步得到的上清液（含可溶性 GST 标记蛋白）上柱，让重力使上柱液自然流出，收集并保存穿透液用于 SDS-PAGE 电泳。GST 和谷胱甘肽之间的结合很缓慢，所以流速一定不能快，否则结合不充分。流速一般在 0.2-1 mL/分钟即可。如要提高 GST 标记蛋白与介质的结合效率，可用本试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上，让细菌裂解液和介质在4℃结合 30 分钟或过夜。也可以将穿透液反复上柱。
11.用 0.5-2 mL 1×PBS 缓冲液洗柱，收集并保存穿透液（含杂蛋白）。
12.用 0.2-1 mL GST 洗脱液洗柱，收集并保存穿透液（含 GST 标记蛋白）。由于可能含蛋白酶污染，所以穿透液不能在 4℃放置，需立即用于后续处理（如浓度测定或 SDS-PAGE 电泳）或-80℃长期放置。
13.对收集的 2 种穿透液和洗脱液进行蛋白定量或 SDS-PAGE 分析。注意：如果不预先脱盐，则只能用 Bradford 法或 OD 检测法（1 OD280 约等于 0.5 mg/mL 蛋白）测定穿透液和洗脱液的蛋白浓度。由于 GST 的分子量为 26 KD，所以在 SDS-PAGE 胶上，GST 标记蛋白将比天然蛋白大 26 KD。
非变性法蛋白沉淀试剂盒10 次原理及特点:
重组蛋白 N 端的 GST 谷胱甘肽 S 转移酶（Glutathione S Transferase）能提高重组蛋白的水溶性，所以常用于蛋白质重组表达。GST-谷胱甘肽亲和层析是利用 GST 标记的蛋白能与谷胱甘肽层析介质结合，并能被还原型谷胱甘肽洗脱的特点而建立，是目前分离纯化 GST 标记蛋白质的重要方法。本产品就是专门用于上述目的，具有下列
特点：
1. 一站式套装，含所需的谷胱甘肽介质、溶液和层析柱，用户只需要提供表达 GST 标记蛋白的细菌（酵母、杆状病毒、培养细胞）即可，非常方便。
2. 专一性强，一次过柱即可获得纯度高达 95%的 GST-标记蛋白。
3. 只能在非变性条件下使用，只可用于纯化没形成包涵体的 GST 标记蛋白。
4. 每次可以处理 20 mL 的表达菌液，适合初步筛选和鉴定。
5. 提供 4 mL 浓度为 50%的谷胱甘肽-Agarose 介质，可吸附 5-10 mgGST 标记蛋白质。
6. 本介质可以反复使用多次。
一:重组蛋白的表达和细菌收集
1. 37℃振荡培养 20 mL 含表达质粒的细菌到 OD600=0.6-0.8。
2. 加 IPTG 到终浓度为 0.1 mM，30℃振荡培养 3 小时或 22℃振荡培养 8小时（或过夜）。
3. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液，弃上清。
4. 用 1×PBS 缓冲液重悬细菌沉淀，4℃ 5000 g 离心 10 分钟，弃上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。

IL10 ProteinSus scrofa (Pig)重组野猪 IL10 / Interleukin-10 蛋白

IL10 ProteinHuman重组人 IL10 / Interleukin-10 蛋白

IL22 ProteinHuman重组人 IL22 / IL-22 / Interleukin 22 蛋白

IL20 ProteinRat重组大鼠 IL20 / Interleukin-20 蛋白

IL20 ProteinHuman重组人 IL20 / Interleukin-20 蛋白

IL24 ProteinHuman重组人 IL-24 / MDA-7 蛋白 (His 标签)

IL10 ProteinHuman重组人 IL10 / Interleukin-10 蛋白 (His 标签)

白细胞介素-12超家族

IL12A ProteinCynomolgus重组食蟹猴 / 恒河猴 IL12A / NKSF1 蛋白 (Fc 标签)

IL12A & IL27B ProteinHuman重组人 IL12A & IL27B Heterodimer 蛋白

IL23 ProteinMarmoset重组绒猴 IL-23 (IL23A & IL12B Heterodimer) 蛋白

IL12B ProteinMarmoset重组绒猴 IL12B / IL-12B 蛋白 (Fc 标签)

IL23 ProteinMouse重组小鼠 IL-23 (IL23A & IL12B Heterodimer) 蛋白

IL12B ProteinMouse重组小鼠 IL12B / IL-12B 蛋白

IL12B ProteinRat重组大鼠 IL12B / IL-12B 蛋白 (His 标签)

IL12B ProteinMouse重组小鼠 IL12B / IL-12B 蛋白 (His 标签)

IL27 ProteinMouse重组小鼠 IL27 / Interleukin-27 蛋白 (His 标签)

非变性法蛋白沉淀试剂盒10 次IL27 ProteinHuman重组人 IL27 / Interleukin-27 蛋白 (His 标签)

IL12B ProteinMouse重组小鼠 IL12B / IL-12B 蛋白 (Fc 标签)

IL12A & IL12B ProteinMouse重组小鼠 IL-12 (IL12A & IL12B Heterodimer) 蛋白

IL12A & IL12B ProteinMouse重组小鼠 IL-12 (IL12A & IL12B Heterodimer) 蛋白

IL12A & IL12B ProteinMouse重组小鼠 IL-12 (IL12A & IL12B Heterodimer) 蛋白

IL12A & IL12B ProteinMouse重组小鼠 IL-12 (IL12A & IL12B Heterodimer) 蛋白

IL23 ProteinHuman重组人 IL-23 (IL23A & IL12B Heterodimer) 蛋白

IL12A & IL12B ProteinHuman重组人 IL-12 (IL12A & IL12B Heterodimer) 蛋白

IL12A ProteinHuman重组人 IL12A / NKSF1 蛋白 (His 标签)

IL12B ProteinHuman重组人 IL12B / P40 蛋白 (His 标签)

IL35 ProteinHuman重组人 IL-35 (IL12A & IL27B) 蛋白 (Fc 标签)

IL12B ProteinHuman重组人 IL12B / P40 蛋白 (Fc 标签)

IL12A ProteinHuman重组人 IL12A / NKSF1 蛋白 (Fc 标签)

白细胞介素-17超家族

IL17F ProteinHuman重组人 IL-17F / IL17F 蛋白

IL17RD ProteinCanine重组狗 IL17RD 蛋白 (His 标签)

IL17A ProteinHuman重组人 IL17 / IL17A 蛋白

IL17A ProteinMarmoset重组绒猴 IL17 / IL17A 蛋白

IL17A ProteinCanine重组狗 IL17 / IL17A 蛋白

IL17A ProteinHuman重组人 IL17 / IL17A 蛋白 (His 标签)

IL25 ProteinRat重组大鼠 Interleukin 25 / IL25 / IL17E 蛋白 (Fc 标签)

IL17A ProteinMouse重组小鼠 IL17 / IL17A 蛋白

IL17A ProteinHuman重组人 IL17 / IL17A 蛋白

IL17A ProteinHuman重组人 IL17 / IL17A 蛋白 (His 标签)

IL17F ProteinHuman重组人 IL-17F / Interleukin-17F 蛋白 (His 标签)

IL25 ProteinMouse重组小鼠 IL25 蛋白 (His 标签)

IL25 ProteinHuman重组人 IL25 蛋白 (Fc 标签)

其他白细胞介素

IL21R ProteinCynomolgus重组食蟹猴 IL-21R / Interleukin-21 Receptor 蛋白 (His 标签)

IL5 ProteinHuman重组人 IL5 / Interleukin 5 蛋白

IL15 ProteinHuman重组人 IL-15 / IL15 / Interleukin 15 蛋白 (His 标签)

IL7 ProteinRat重组大鼠 IL7 / interleukin 7 蛋白

IL4 ProteinMouse重组小鼠 IL4 / Interleukin-4 蛋白 (Q136D, Y139D, His 标签)

IL21 ProteinRat重组大鼠 IL21 / Interleukin 21 蛋白 (His 标签)

IL7 ProteinHuman重组人 IL7 / interleukin 7 蛋白

IL13 ProteinMouse重组小鼠 IL13 / ALRH 蛋白

IL21 ProteinCanine重组狗 IL21 / Interleukin 21 蛋白

IL21 ProteinMouse重组小鼠 IL21 / Interleukin 21 蛋白

IL4 ProteinCanine重组狗 IL4 / Interleukin-4 蛋白

IL2 ProteinMouse重组小鼠 Interleukin-2 / IL-2 蛋白

IL3 ProteinRat重组大鼠 IL3 / interleukin 3 蛋白 (His 标签)

IL5 ProteinCanine重组狗 IL5 蛋白 (His 标签)

IL2 ProteinCanine重组狗 Interleukin-2 / IL-2 蛋白 (147 Cys/Ser)

IL5 ProteinMouse重组小鼠 IL5 蛋白 (His 标签)

IL2 ProteinRat重组大鼠 Interleukin-2 / IL-2 蛋白

IL16 ProteinHuman重组人 IL16 / Interleukin-16 蛋白 (His 标签)

IL13 ProteinCynomolgus重组食蟹猴 IL13 / ALRH 蛋白 (His 标签)

IL13 ProteinHuman重组人 IL13 / ALRH 蛋白

IL21 ProteinHuman重组人 Interleukin-21 / IL-21 蛋白

IL2 ProteinHuman重组人 Interleukin-2 / IL-2 蛋白

IL3 ProteinHuman重组人 IL-3 / Interleukin-3 蛋白 (His 标签)

IL9 ProteinHuman重组人 IL-9 / Interleukin-9 蛋白 (His 标签)

IL4 ProteinHuman重组人 IL4 / Interleukin-4 蛋白

IL32 ProteinHuman重组人 Interleukin-32 / IL-32 蛋白 (isoform alpha, His 标签)

IL34 ProteinMouse重组小鼠 IL-34 蛋白 (His 标签)

IL13 ProteinCynomolgus重组食蟹猴 IL13 / ALRH 蛋白