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SDS-PAGE 电泳液 ( 干粉 )5L
点击次数:274发布时间:2017/1/12 13:20:57
更新日期:2022/8/17 11:57:28
所 在 地:中国大陆
产品型号:
优质供应
详细内容
SDS-PAGE 电泳液 ( 干粉 )5L原理及特点:
重组蛋白 N 端的 GST 谷胱甘肽 S 转移酶(Glutathione S Transferase)能提高重组蛋白的水溶性,所以常用于蛋白质重组表达。GST-谷胱甘肽亲和层析是利用 GST 标记的蛋白能与谷胱甘肽层析介质结合,并能被还原型谷胱甘肽洗脱的特点而建立,是目前分离纯化 GST 标记蛋白质的重要方法。本产品就是专门用于上述目的,具有下列
SDS-PAGE 上样液,5×10mL特点:
1. 一站式套装,含所需的谷胱甘肽介质、溶液和层析柱,用户只需要提供表达 GST 标记蛋白的细菌(酵母、杆状病毒、培养细胞)即可,非常方便。
2. 专一性强,一次过柱即可获得纯度高达 95%的 GST-标记蛋白。
3. 只能在非变性条件下使用,只可用于纯化没形成包涵体的 GST 标记蛋白。
4. 每次可以处理 20 mL 的表达菌液,适合初步筛选和鉴定。
5. 提供 4 mL 浓度为 50%的谷胱甘肽-Agarose 介质,可吸附 5-10 mgGST 标记蛋白质。
6. 本介质可以反复使用多次。
一:重组蛋白的表达和细菌收集
1. 37℃振荡培养 20 mL 含表达质粒的细菌到 OD600=0.6-0.8。
2. 加 IPTG 到终浓度为 0.1 mM,30℃振荡培养 3 小时或 22℃振荡培养 8小时(或过夜)。
3. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液,弃上清。
4. 用 1×PBS 缓冲液重悬细菌沉淀,4℃ 5000 g 离心 10 分钟,弃上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。
SDS-PAGE 电泳液 ( 干粉 )5L二:细胞裂解
5. 如果用本产品 A 型,用 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液(1 mL 1×PBS 缓冲液+50 uL 溶液 A+ 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液)重悬细菌沉淀,冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索,一般选 1K-10K 频率处理 15 次,每次20 秒,间隔 1 分钟(必需放置在冰上)。裂解物不能粘稠,否则会堵塞
层析柱。
6. 如果用本产品 B 型,在 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液(在 20 mL1×PBS 缓冲液中加入所有 30 mg 溶菌酶干粉,溶解后分装成 1 mL/管,取一管使用,剩余的-20℃放置)中加入 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液和 1 uL Benzonase,用此混合液重悬细菌沉淀后冰上放置 30 分钟,得到细菌裂解物。
7. 将超声或酶法细胞裂解物在 13000 g 4℃离心 10 分钟去除未裂解细胞和裂解细胞碎片以防堵柱,所得上清即含可溶性 GST 标记蛋白。
三:层析柱的制备和 GST 蛋白纯化
8. 摇晃将谷胱甘肽-Agarose 介质充分混匀后,取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中(介质用量需要根据 GST 蛋白产量决定,100 mL 菌液一般使用 200 uL 介质即可)。下列步骤各溶液的用量均针对 200 uL 介质而定,如果介质用量不同,各溶液用量需相应调整。
9. 用 5 mL 预冷的 1×PBS 缓冲液洗柱。
10.将第 7 步得到的上清液(含可溶性 GST 标记蛋白)上柱,让重力使上柱液自然流出,收集并保存穿透液用于 SDS-PAGE 电泳。GST 和谷胱甘肽之间的结合很缓慢,所以流速一定不能快,否则结合不充分。流速一般在 0.2-1 mL/分钟即可。如要提高 GST 标记蛋白与介质的结合效率,可用本试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上,让细菌裂解液和介质在4℃结合 30 分钟或过夜。也可以将穿透液反复上柱。
11.用 0.5-2 mL 1×PBS 缓冲液洗柱,收集并保存穿透液(含杂蛋白)。
12.用 0.2-1 mL GST 洗脱液洗柱,收集并保存穿透液(含 GST 标记蛋白)。由于可能含蛋白酶污染,所以穿透液不能在 4℃放置,需立即用于后续处理(如浓度测定或 SDS-PAGE 电泳)或-80℃长期放置。
13.对收集的 2 种穿透液和洗脱液进行蛋白定量或 SDS-PAGE 分析。注意:如果不预先脱盐,则只能用 Bradford 法或 OD 检测法(1 OD280 约等于 0.5 mg/mL 蛋白)测定穿透液和洗脱液的蛋白浓度。由于 GST 的分子量为 26 KD,所以在 SDS-PAGE 胶上,GST 标记蛋白将比天然蛋白大 26 KD。
兔子C反应蛋白(CRP)elisa试剂盒rabbit C-Reactive Protein,CRP ELISA Kit96T/48T
兔子内皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA试剂盒Rabbit Endothelial nitric oxide synthase 3,eNOS-3 ELISA Kit 96T/48T
兔子胆固醇酯转移蛋白(CETP)ELISA试剂盒Rabbit cholest erolester transfer protein,CETP ELISA Kit 96T/48T
兔子可溶性粘附分子(Sam)ELISA试剂盒Rabbit soluble adhesion molecules,Sam ELISA Kit 96T/48T
兔子抗中性粒细胞颗粒抗体(ANGA)ELISA试剂盒Rabbit anti-neutrophil granules antibody,ANGA ELISA Kit 96T/48T
兔子孕激素/孕酮(PROG)ELISA试剂盒Rabbit Progesterone,PROG ELISA Kit 96T/48T
兔子胶原酶II(Collagenase II)ELISA试剂盒Rabbit Collagenase Type II ELISA Kit96T/48T
兔子胶原酶I(Collagenase I)ELISA试剂盒 Rabbit Collagenase I ELISA Kit96T/48T
兔子肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体3(TRAIL-R3)ELISA试剂盒Rabbit tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand 3,TRAIL-R3 ELISA Kit 96T/48T
兔子巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISA试剂盒Rabbit Macrophage Inflammatory Protein-1α,MIP-1α ELISA Kit96T/48T
兔子神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)ELISA试剂盒Rabbit glial fibrillary acidic protein,GFAP ELISA Kit 96T/48T
兔子组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)ELISA试剂盒rabbit Tissue-type Plasiminogen Actilyse,t-PA ELISA Kit96T/48T
鸭白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA试剂盒Duck Interleukin-8,IL-8 ELISA Kit96T/48T
鸭白介素4(IL-4)ELISA试剂盒Duck Interleukin-4,IL-4 ELISA Kit96T/48T
鸭白介素2(IL-2)ELISA试剂盒Duck Interleukin 2,IL-2 ELISA Kit96T/48T
鸭子碳酸酐酶(CA)ELISA试剂盒Duck carbonic anhydrase,CA ELISA Kit 96T/48T
鸭抗凝血素抗体(aPT1/aPT2)ELISA试剂盒Duck anti-prothrombins antibodies,aPT1/aPT2 ELISA Kit 96T/48T
鸭环磷酸腺苷(cAMP)ELISA试剂盒Duck cyclic adenosine monophosphate,cAMP ELISA Kit 96T/48T
鸭免疫球蛋白E(IgE)ELISA试剂盒Duck Immunoglobulin E,IgE ELISA Kit96T/48T
SDS-PAGE 电泳液 ( 干粉 )5L鸭主要组织相容性复合体(MHC)ELISA试剂盒 Duck major histocompatibility complex,MHC ELISA Kit 96T/48T
鸭病毒性肠炎病毒(DEV)ELISA试剂盒Duck virus enteritis,DEV ELISA Kit 96T/48T
鸭白介素6(IL-6)ELISA试剂盒 Duck Interleukin 6,IL-6 ELISA Kit 96T/48T
鸭白介素1(IL-1)ELISA试剂盒 Duck Interleukin 1,IL-1 ELISA Kit 96T/48T
鸭γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒Duck Interferon γ ,IFN-γ ELISA Kit96T/48T
禽脑脊髓炎(AE)ELISA试剂盒Avian encephalomyelitis,AE ELISA Kit96T/48T
毒蛇因子(CVF) ELISA试剂盒Cobra venom factor,CVF ELISA Kit96T/48T
牛蛙生长激素(GH) ELISA试剂盒bullfrog growth hormone,GH ELISA Kit96T/48T
家蚕卵黄蛋白(LT) ELISA试剂盒Bombyx mori Livetin,LT ELISA Kit96T/48T
蝶蛹金小蜂卵黄蛋白原(vtg)ELISA试剂盒Nasoniavitripennis vitellogenin,Vtg ELISA Kit96T/48T
红螯光壳螯虾卵黄脂磷蛋白/卵黄磷蛋白(Lv/Vn)ELISA试剂盒Cherax quadricarinatus lipovitellin/vitellin,Lv/Vn ELISA Kit 96T/48T
罗氏沼虾诺达病毒(MrNV)ELISA试剂盒Macrobrachium rosenbergii Nodavirus,MrNV ELISA Kit96T/48T
α-银环蛇毒素(α-BGT)ELISA试剂盒 α-bungarotoxin,α-BGT ELISA Kit96T/48T
宿主残留蛋白(E.coli P)ELISA试剂盒 Escherichia coli Protein,E.coli P ELISA Kit96T/48T
黄曲霉毒素(AFT)ELISA试剂盒 Aflatoxin,AFT ELISA Kit96T/48T
苏云金芽孢杆菌蛋白(BT)ELISA试剂盒 Bacillus thuringiensis,BT ELISA Kit96T/48T
牛丙酮检测(acetone)ELISA试剂盒 Bovine acetone ELISA Kit96T/48T
牛结核病抗体(TB-Ab)ELISA试剂盒Elisa2*96孔
荷兰赛迪口蹄疫0型2板ELISA试剂盒Elisa2*96孔
猪瘟病毒抗体ELISA试剂盒Elisa5*96孔
口蹄疫非结构蛋白抗体ELISA试剂盒Elisa5*96孔
猪瘟抗原2板ELISA试剂盒Elisa2*96孔
伪狂犬病毒gE2.0抗体ELISA试剂盒Elisa5*96孔
蓝耳病ELISA试剂盒Elisa5*96孔
圆环病毒IgGELISA试剂盒Elisa5*96孔
绵羊磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)ELISA试剂盒Sheep Phosphorylated adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK ELISA Kit96T/48T
绵羊白介素2(IL-2)ELISA试剂盒Sheep Interleukin 2,IL-2 ELISA Kit 96T/48T
绵羊主要组织相容性复合体(MHC)ELISA试剂盒Sheep major histocompatibility complex,MHC ELISA Kit 96T/48T
绵羊白介素6(IL-6)ELISA试剂盒 Sheep Interleukin 6,IL-6 ELISA Kit 96T/48T
绵羊白介素1β(IL-1β)ELISA试剂盒Sheep Interleukin 1β,IL-1β ELISA Kit 96T/48T
绵羊白介素1(IL-1)ELISA试剂盒Sheep Interleukin 1,IL-1 ELISA Kit 96T/48T
绵羊补体片段3b受体(C3bR)ELISA试剂盒Sheep Complement fragment 3b rccptor,C3bR ELISA Kit 96T/48T
绵羊白介素2受体(IL-2R)ELISA试剂盒Sheep Interleukin-2 receptor,IL-2R ELISA Kit 96T/48T
猴白介素4(IL-4)ELISA试剂盒Monkey Interleukin 4,IL-4 ELISA Kit 96T/48T
猴白介素2(IL-2)ELISA试剂盒Monkey Interleukin 2,IL-2 ELISA Kit96T/48T
猴Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)ELISA试剂盒 Monkey Collagen Type Ⅳ,Col Ⅳ ELISA Kit96T/48T
猴Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)ELISA试剂盒Monkey N-terminal procollagen Ⅲ propeptide,PⅢNP ELISA Kit96T/48T
猴透明质酸(HA)ELISA试剂盒 Monkey Hyaluronic acid,HA ELISA Kit96T/48T
猴β2微球蛋白(BMG/β2-MG)ELISA试剂盒Monkey β2-microglobulin,BMG/β2-MG ELISA Kit96T/48T
猴B病毒(BV)ELISA试剂盒Monkey B virus Infections ELISA Kit96T/48T
猴载脂蛋白B100(apo-B100)ELISA试剂盒 Monkey apoprotein B100,apo-B100 ELISA Kit96T/48T
猴载脂蛋白A1(apo-A1)ELISA试剂盒 Monkey apoprotein A1,apo-A1 ELISA Kit96T/48T
猴白介素6(IL-6)ELISA试剂盒Monkey Interleukin 6,IL-6 ELISA Kit96T/48T
猴γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒Monkey Interferon γ ,IFN-γ ELISA Kit96T/48T