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SDS-PAGE 电泳液 ( 干粉 )20L

点击次数:197发布时间:2017/1/12 13:21:25

SDS-PAGE 电泳液 ( 干粉 )20L

更新日期:2022/8/17 11:57:28

所 在 地:中国大陆

产品型号:

简单介绍:SDS-PAGE 电泳液 ( 干粉 )20L温运输和保存,溶菌酶、Benzonase 和 PMSF 需低温运输。收到货后,介质需 4℃保存,溶菌酶、Benzonase 和 PMSF 需-20℃保存,有效期一年。

相关标签:蛋白质研究 

优质供应

详细内容

SDS-PAGE 电泳液 ( 干粉 )20L原理及特点:
重组蛋白 N 端的 GST 谷胱甘肽 S 转移酶(Glutathione S Transferase)能提高重组蛋白的水溶性,所以常用于蛋白质重组表达。GST-谷胱甘肽亲和层析是利用 GST 标记的蛋白能与谷胱甘肽层析介质结合,并能被还原型谷胱甘肽洗脱的特点而建立,是目前分离纯化 GST 标记蛋白质的重要方法。本产品就是专门用于上述目的,具有下列
特点:
1. 一站式套装,含所需的谷胱甘肽介质、溶液和层析柱,用户只需要提供表达 GST 标记蛋白的细菌(酵母、杆状病毒、培养细胞)即可,非常方便。
2. 专一性强,一次过柱即可获得纯度高达 95%的 GST-标记蛋白。
3. 只能在非变性条件下使用,只可用于纯化没形成包涵体的 GST 标记蛋白。
4. 每次可以处理 20 mL 的表达菌液,适合初步筛选和鉴定。
5. 提供 4 mL 浓度为 50%的谷胱甘肽-Agarose 介质,可吸附 5-10 mgGST 标记蛋白质。
6. 本介质可以反复使用多次。
一:重组蛋白的表达和细菌收集
1. 37℃振荡培养 20 mL 含表达质粒的细菌到 OD600=0.6-0.8。
2. 加 IPTG 到终浓度为 0.1 mM,30℃振荡培养 3 小时或 22℃振荡培养 8小时(或过夜)。
3. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液,弃上清。
4. 用 1×PBS 缓冲液重悬细菌沉淀,4℃ 5000 g 离心 10 分钟,弃上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。
SDS-PAGE 电泳液 ( 干粉 )20L二:细胞裂解
5. 如果用本产品 A 型,用 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液(1 mL 1×PBS 缓冲液+50 uL 溶液 A+ 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液)重悬细菌沉淀,冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索,一般选 1K-10K 频率处理 15 次,每次20 秒,间隔 1 分钟(必需放置在冰上)。裂解物不能粘稠,否则会堵塞
层析柱。
6. 如果用本产品 B 型,在 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液(在 20 mL1×PBS 缓冲液中加入所有 30 mg 溶菌酶干粉,溶解后分装成 1 mL/管,取一管使用,剩余的-20℃放置)中加入 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液和 1 uL Benzonase,用此混合液重悬细菌沉淀后冰上放置 30 分钟,得到细菌裂解物。
7. 将超声或酶法细胞裂解物在 13000 g 4℃离心 10 分钟去除未裂解细胞和裂解细胞碎片以防堵柱,所得上清即含可溶性 GST 标记蛋白。
三:层析柱的制备和 GST 蛋白纯化
8. 摇晃将谷胱甘肽-Agarose 介质充分混匀后,取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中(介质用量需要根据 GST 蛋白产量决定,100 mL 菌液一般使用 200 uL 介质即可)。下列步骤各溶液的用量均针对 200 uL 介质而定,如果介质用量不同,各溶液用量需相应调整。
9. 用 5 mL 预冷的 1×PBS 缓冲液洗柱。
10.将第 7 步得到的上清液(含可溶性 GST 标记蛋白)上柱,让重力使上柱液自然流出,收集并保存穿透液用于 SDS-PAGE 电泳。GST 和谷胱甘肽之间的结合很缓慢,所以流速一定不能快,否则结合不充分。流速一般在 0.2-1 mL/分钟即可。如要提高 GST 标记蛋白与介质的结合效率,可用本试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上,让细菌裂解液和介质在4℃结合 30 分钟或过夜。也可以将穿透液反复上柱。
11.用 0.5-2 mL 1×PBS 缓冲液洗柱,收集并保存穿透液(含杂蛋白)。
12.用 0.2-1 mL GST 洗脱液洗柱,收集并保存穿透液(含 GST 标记蛋白)。由于可能含蛋白酶污染,所以穿透液不能在 4℃放置,需立即用于后续处理(如浓度测定或 SDS-PAGE 电泳)或-80℃长期放置。
13.对收集的 2 种穿透液和洗脱液进行蛋白定量或 SDS-PAGE 分析。注意:如果不预先脱盐,则只能用 Bradford 法或 OD 检测法(1 OD280 约等于 0.5 mg/mL 蛋白)测定穿透液和洗脱液的蛋白浓度。由于 GST 的分子量为 26 KD,所以在 SDS-PAGE 胶上,GST 标记蛋白将比天然蛋白大 26 KD。

兔子髓磷脂碱性蛋白(MBP)elisa试剂盒Rabbit myelin basic protein,MBP ELISA Kit 96T/48T

兔子前列腺素E2(PGE2)ELISA试剂盒rabbit Prostaglandin E2,PG-E2 ELISA Kit96T/48T

兔子前列腺素E1(PGE1)ELISA试剂盒rabbit Prostaglandin E1,PGE1 ELISA Kit 96T/48T

兔子皮质酮/肾上腺酮(CORT)ELISA试剂盒rabbit Corticosterone,CORT ELISA Kit96T/48T

兔子皮质醇(Cortisol)ELISA试剂盒Rabbit Cortisol ELISA Kit 96T/48T

兔子脑钠素/脑钠尿肽(BNP)ELISA试剂盒rabbit brain natriuretic peptide,BNP ELISA Kit96T/48T

兔子内皮抑素(ES)ELISA试剂盒rabbit Endostatin,ES ELISA Kit 96T/48T

SDS-PAGE 电泳液 ( 干粉 )20L兔子内皮素1(ET-1)ELISA试剂盒rabbit Endothelin 1,ET-1 ELISA Kit 96T/48T

兔子免疫球蛋白G(IgG)ELISA试剂盒 rabbit Immunoglobulin G,IgG ELISA Kit96T/48T

兔子免疫球蛋白E(IgE)ELISA试剂盒rabbit Immunoglobulin E,IgE ELISA Kit96T/48T

兔子免疫球蛋白A(IgA)ELISA试剂盒 rabbit Immunoglobulin A,IgA ELISA Kit 96T/48T

兔子可溶性血管细胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA试剂盒Rabbit soluble Vascuolar cell adhesion molecule 1,sVCAM-1 ELISA Kit96T/48T

兔子可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)ELISA试剂盒rabbit Soluble Intercellular Adhesion Molecule-1,sICAM-1 ELISA Kit 96T/48T

兔子可溶性E选择素(sE-selectin)ELISA试剂盒rabbit soluble E-selectin,sE-selectin ELISA Kit96T/48T

兔子巨噬细胞炎性蛋白5(MIP-5)ELISA试剂盒rabbit macrophage inflammatory protein 5,MIP-5 ELISA Kit 96T/48T

兔子碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)ELISA试剂盒 rabbit basic fibroblast growth factor,bFGF ELISA Kit 96T/48T

兔子免疫球蛋白M(IgM)ELISA试剂盒 rabbit Immunoglobulin M,IgM ELISA Kit 96T/48T

兔子甲状腺素(T4)ELISA试剂盒rabbit thyroxine,T4 ELISA Kit 96T/48T

兔子基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA试剂盒rabbit tissue inhibitors of metalloproteinase 1,TIMP-1 ELISA Kit96T/48T

兔子基质金属蛋白酶9(MMP-9)ELISA试剂盒rabbit matrix metalloproteinase 9,MMP-9 ELISA Kit 96T/48T

兔子基质金属蛋白酶4(MMP-4)ELISA试剂盒rabbit matrix metalloproteinase 4,MMP-4 ELISA Kit96T/48T

兔子基质金属蛋白酶5(MMP-5)ELISA试剂盒rabbit matrix metalloproteinase 5,MMP-5 ELISA Kit96T/48T

兔子睾酮(T)ELISA试剂盒rabbit Testoterone,T ELISA Kit 96T/48T

兔子肝细胞生长因子(HGF)ELISA试剂盒rabbit hepatocyte growth factor,HGF ELISA Kit 96T/48T

兔子γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒 rabbit Interferon γ ,IFN-γ ELISA Kit 96T/48T

兔子端粒酶(TE)ELISA试剂盒rabbit telomerase,TE ELISA Kit 96T/48T

兔子单核细胞趋化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA试剂盒protein 1/monocyte chemotactic and activating factor,MCP1/MCAF ELISA Kit96T/48T

兔子促肾上腺皮质激素(ACTH)ELISA试剂盒rabbit adrencocorticotropic hormone,ACTH ELISA Kit96T/48T

兔子促卵泡素(FSH)ELISA试剂盒rabbit follicle-stimulating hormone,FSH ELISA Kit 96T/48T

兔子促甲状腺素(TSH)ELISA试剂盒rabbit Thyroid Stimulating Hormone,TSH ELISA Kit 96T/48T

兔子雌二醇(E2)ELISA试剂盒rabbit Estradiol,E2 ELISA Kit96T/48T

兔子肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)ELISA试剂盒rabbit intestinal fatty acid binding protein,iFABP ELISA Kit 96T/48T

兔子表皮生长因子(EGF)ELISA试剂盒 Rabbit Epidermal growth factor,EGF ELISA Kit 96T/48T

兔子白血病抑制因子受体(LIFR)ELISA试剂盒rabbit leukemia inhibitory factor receptor,LIFR ELISA Kit 96T/48T

兔子白三烯B4(LTB4)ELISA试剂盒rabbit Leukotriene B4,LT-B4 ELISA Kit 96T/48T

兔子白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA试剂盒rabbit Interleukin 8,IL-8 ELISA Kit96T/48T

兔子白介素6(IL-6)ELISA试剂盒rabbit Interleukin 6,IL-6 ELISA Kit96T/48T

兔子白介素4(IL-4)ELISA试剂盒rabbit Interleukin 4,IL-4 ELISA Kit 96T/48T

兔子白介素3(IL-3)ELISA试剂盒Rabbit Interleukin 3,IL-3 ELISA Kit 96T/48T

兔子白介素1β (IL-1β)ELISA试剂盒Rabbit Interleukin 1β,IL-1β ELISA Kit 96T/48T

兔肌钙蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)ELISA试剂盒Rabbit Troponin Ⅰ,Tn-Ⅰ ELISA Kit 96T/48T

兔子白介素10(IL-10)ELISA试剂盒Rabbit Interleukin 10,IL-10 ELISA Kit96T/48T

兔子白介素1(IL-1)ELISA试剂盒Rabbit Interleukin 1,IL-1 ELISA Kit96T/48T

兔子S100B蛋白(S-100B)ELISA试剂盒rabbit Soluble protein-100B,S-100B ELISA Kit96T/48T

兔子S100蛋白(S-100)ELISA试剂盒rabbit Soluble protein-100,S-100 ELISA Kit96T/48T

兔主要组织相容性复合体Ⅱ类(MHCⅡ/RLAⅡ)ELISA试剂盒Rabbit major histocompatibility complexⅡ,MHCⅡ/RLAⅡ ELISA Kit 96T/48T

兔子凝血酶受体(TR)ELISA试剂盒Rabbit thrombin receptor,TR ELISA Kit 96T/48T

兔子可溶性P选择素(sP-selectin)ELISA试剂盒rabbit soluble P-selectin,sP-selectin ELISA Kit96T/48T

兔子Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)ELISA试剂盒rabbit Carboxyterminal propeptide of type Ⅰ procollagen,PⅠCP ELISA Kit96T/48T

兔子Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)ELISA试剂盒rabbit Collagen Type Ⅰ,Col Ⅰ ELISA Kit96T/48T

兔子Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)ELISA试剂盒rabbit Collagen Type Ⅱ,Col Ⅱ ELISA Kit96T/48T

兔子Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)ELISA试剂盒rabbit N-terminal procollagen Ⅲ propeptide,PⅢNP ELISA Kit96T/48T

兔子Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNT)ELISA试剂盒rabbit procollagen Ⅲ N-terminal peptide,PⅢNT ELISA Kit 96T/48T

兔子凝血因子Ⅱ(FⅡ)ELISA试剂盒Rabbit coagulation factor Ⅱ,FⅡ ELISA Kit 96T/48T

 

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