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长效期 SDS-PAGE 配胶液200mL
点击次数:198发布时间:2017/1/12 13:23:09
更新日期:2022/8/17 11:57:28
所 在 地:中国大陆
产品型号:
优质供应
详细内容
长效期 SDS-PAGE 配胶液200mL原理及特点:
重组蛋白 N 端的 GST 谷胱甘肽 S 转移酶(Glutathione S Transferase)能提高重组蛋白的水溶性,所以常用于蛋白质重组表达。GST-谷胱甘肽亲和层析是利用 GST 标记的蛋白能与谷胱甘肽层析介质结合,并能被还原型谷胱甘肽洗脱的特点而建立,是目前分离纯化 GST 标记蛋白质的重要方法。本产品就是专门用于上述目的,具有下列
特点:
1. 一站式套装,含所需的谷胱甘肽介质、溶液和层析柱,用户只需要提供表达 GST 标记蛋白的细菌(酵母、杆状病毒、培养细胞)即可,非常方便。
2. 专一性强,一次过柱即可获得纯度高达 95%的 GST-标记蛋白。
3. 只能在非变性条件下使用,只可用于纯化没形成包涵体的 GST 标记蛋白。
4. 每次可以处理 20 mL 的表达菌液,适合初步筛选和鉴定。
5. 提供 4 mL 浓度为 50%的谷胱甘肽-Agarose 介质,可吸附 5-10 mgGST 标记蛋白质。
6. 本介质可以反复使用多次。
一:重组蛋白的表达和细菌收集
1. 37℃振荡培养 20 mL 含表达质粒的细菌到 OD600=0.6-0.8。
2. 加 IPTG 到终浓度为 0.1 mM,30℃振荡培养 3 小时或 22℃振荡培养 8小时(或过夜)。
3. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液,弃上清。
4. 用 1×PBS 缓冲液重悬细菌沉淀,4℃ 5000 g 离心 10 分钟,弃上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。
长效期 SDS-PAGE 配胶液200mL二:细胞裂解
5. 如果用本产品 A 型,用 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液(1 mL 1×PBS 缓冲液+50 uL 溶液 A+ 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液)重悬细菌沉淀,冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索,一般选 1K-10K 频率处理 15 次,每次20 秒,间隔 1 分钟(必需放置在冰上)。裂解物不能粘稠,否则会堵塞
层析柱。
6. 如果用本产品 B 型,在 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液(在 20 mL1×PBS 缓冲液中加入所有 30 mg 溶菌酶干粉,溶解后分装成 1 mL/管,取一管使用,剩余的-20℃放置)中加入 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液和 1 uL Benzonase,用此混合液重悬细菌沉淀后冰上放置 30 分钟,得到细菌裂解物。
7. 将超声或酶法细胞裂解物在 13000 g 4℃离心 10 分钟去除未裂解细胞和裂解细胞碎片以防堵柱,所得上清即含可溶性 GST 标记蛋白。
三:层析柱的制备和 GST 蛋白纯化
8. 摇晃将谷胱甘肽-Agarose 介质充分混匀后,取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中(介质用量需要根据 GST 蛋白产量决定,100 mL 菌液一般使用 200 uL 介质即可)。下列步骤各溶液的用量均针对 200 uL 介质而定,如果介质用量不同,各溶液用量需相应调整。
9. 用 5 mL 预冷的 1×PBS 缓冲液洗柱。
10.将第 7 步得到的上清液(含可溶性 GST 标记蛋白)上柱,让重力使上柱液自然流出,收集并保存穿透液用于 SDS-PAGE 电泳。GST 和谷胱甘肽之间的结合很缓慢,所以流速一定不能快,否则结合不充分。流速一般在 0.2-1 mL/分钟即可。如要提高 GST 标记蛋白与介质的结合效率,可用本试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上,让细菌裂解液和介质在4℃结合 30 分钟或过夜。也可以将穿透液反复上柱。
11.用 0.5-2 mL 1×PBS 缓冲液洗柱,收集并保存穿透液(含杂蛋白)。
12.用 0.2-1 mL GST 洗脱液洗柱,收集并保存穿透液(含 GST 标记蛋白)。由于可能含蛋白酶污染,所以穿透液不能在 4℃放置,需立即用于后续处理(如浓度测定或 SDS-PAGE 电泳)或-80℃长期放置。
13.对收集的 2 种穿透液和洗脱液进行蛋白定量或 SDS-PAGE 分析。注意:如果不预先脱盐,则只能用 Bradford 法或 OD 检测法(1 OD280 约等于 0.5 mg/mL 蛋白)测定穿透液和洗脱液的蛋白浓度。由于 GST 的分子量为 26 KD,所以在 SDS-PAGE 胶上,GST 标记蛋白将比天然蛋白大 26 KD。
鸡C反应蛋白(CRP)elisa试剂盒 Chicken C-Reactive Protein,CRP ELISA Kit 96T/48T
鸡血管内皮细胞生长因子(VEGF)ELISA试剂盒 Chicken Vascular Endothelial cell Growth Factor,VEGF ELISA Kit 96T/48T
鸡免疫球蛋白G(IgG)ELISA试剂盒 Chicken Immunoglobulin G,IgG ELISA Kit 96T/48T
鸡碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)ELISA试剂盒 Chicken basic fibroblast growth factor,bFGF ELISA Kit 96T/48T
鸡可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)ELISA试剂盒Chicken Soluble Intercellular Adhesion Molecule-1,sICAM-1 ELISA Kit 96T/48T
鸡可溶性E选择素(sE-selectin)ELISA试剂盒 Chicken soluble E-selectin,sE-selectin ELISA Kit 96T/48T
鸡表皮生长因子(EGF)ELISA试剂盒 Chicken Epidermal growth factor,EGF ELISA Kit 96T/48T
鸡胰岛素样生长因子1(IGF-1)ELISA试剂盒 Chicken Insulin-like growth factors 1,IGF-1 ELISA Kit 96T/48T
鸡生长激素(GH)ELISA试剂盒 Chicken growth hormone,GH ELISA Kit 96T/48T
鸡乙酰乙酸检测(ACAC)ELISA试剂盒Chicken Acetoacetic acid,ACAC ELISA Kit 96T/48T
鸡传染性鼻炎抗体(IC)ELISA试剂盒Chicken infectious coryza,ic ELISA Kit96T/48T
鸡透明质酸(HA)ELISA试剂盒Chicken Hyaluronic acid,HA ELISA Kit96T/48T
鸡催乳素(PRL)ELISA试剂盒Chicken prolactin,PRL ELISA Kit96T/48T
鸡白血病病毒抗原(ALV-AG)ELISA试剂盒Chicken Avian Leukosis Virus AG,ALV-AG ELISA Kit96T/48T
鸡促卵泡素(FSH)ELISA试剂盒Chicken follicle-stimulating hormone,FSH ELISA Kit 96T/48T
鸡促黄体激素(LH)ELISA试剂盒Chicken Luteinizing Hormone,LH ELISA Kit96T/48T
鸡γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒 Chicken Interferon γ ,IFN-γ ELISA Kit 96T/48T
鸡白介素6(IL-6)ELISA试剂盒Chicken Interleukin 6,IL-6 ELISA Kit96T/48T
鸡碳酸酐酶(CA)ELISA试剂盒Chicken carbonic anhydrase,CA ELISA Kit96T/48T
鸡抗凝血酶Ⅲ抗体(AT-Ⅲ)ELISA试剂盒Chicken Anti-Thrombin Ⅲ,AT-Ⅲ ELISA Kit 96T/48T
鸡热休克蛋白20(HSP-20)ELISA试剂盒 Chicken Heat Shock Protein 20,HSP-20 ELISA Kit 96T/48T
鸡热休克蛋白60(Hsp-60)ELISA试剂盒Chicken Heat Shock Protein 60,HSP-60 ELISA Kit 96T/48T
鸡17羟皮质类固醇(17-OHCS)ELISA试剂盒Hydroxycorticosteroids,17-OHCS ELISA Kit 96T/48T
鸡白介素4(IL-4)ELISA试剂盒 Chicken Interleukin 4,IL-4 ELISA Kit 96T/48T
鸡白介素2(IL-2)ELISA试剂盒Chicken Interleukin 2,IL-2 ELISA Kit96T/48T
鸡一氧化氮(NO)ELISA试剂盒Chicken nitric oxide,NO ELISA Kit 96T/48T
鸡单纯疱疹病毒Ⅱ型抗体(HSVⅡ-Ab)ELISA试剂盒 Chicken Herpes simplexvirus Ⅱ antibody,HSVⅡ-Ab ELISA Kit 96T/48T
鸡补体3裂解产物(C3SP)ELISA试剂盒Chicken Complement 3 split product,C3SP ELISA Kit 96T/48T
鸡肾上腺髓质素(ADM)ELISA试剂盒 Chicken adrenomedullin,ADM ELISA Kit96T/48T
鸡巨噬细胞替代激活相关化学因子1(AmAC-1)ELISA试剂盒Chicken Alternative macrophage activation-associated CC chemokine 1,AmAC-1 ELISA Kit96T/48T
鸡免疫核糖核酸(Irna)ELISA试剂盒 Chicken Immune RNA,Irna ELISA Kit96T/48T
鸡β内酰胺酶(β-lactamase)ELISA试剂盒 Chicken β-lactamase ELISA Kit96T/48T
鸡流行性乙型脑炎抗体IgG(JE IgG)ELISA试剂盒Chicken Japanese Encephalitis IgG,JE IgG ELISA Kit 96T/48T
长效期 SDS-PAGE 配胶液200mL鸡α葡萄糖苷酶(a-Glu)ELISA试剂盒Chicken α-Glucosidase,a-Glu ELISA Kit 96T/48T
鸡血小板因子4(PF-4/CXCL4)ELISA试剂盒Chicken Platelet Factor 4,PF-4 ELISA Kit 96T/48T
鸡肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体3(TRAIL-R3)ELISA试剂盒Chicken tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand 3,TRAIL-R3 ELISA Kit 96T/48T
鸡L苯丙氨酸解氨酶(PAL)ELISA试剂盒 Chicken L-Phenylalanine ammonla-lyase,PAL ELISA Kit 96T/48T
鸡烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)ELISA试剂盒 Chicken nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH ELISA Kit 96T/48T
鸡B因子(BF)ELISA试剂盒Chicken factor B,BF ELISA Kit 96T/48T
鸡5核苷酸酶(5-NT)ELISA试剂盒 Chicken 5-Nucleotidase,5-NT ELISA Kit 96T/48T
鸡层连蛋白/板层素(LN)ELISA试剂盒 Chicken Laminin,LN ELISA Kit 96T/48T
鸡17-酮类固醇(17-KS)ELISA试剂盒Chicken 17-ketosteroids,17-KS ELISA Kit 96T/48T
鸡N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA试剂盒Chicken N-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAG ELISA Kit 96T/48T
鸡神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)ELISA试剂盒Chicken glial fibrillary acidic protein,GFAP ELISA Kit 96T/48T
鸡白介素17(IL-17)ELISA试剂盒 Chicken Interleukin 17,IL-17 ELISA Kit 96T/48T
鸡1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)ELISA试剂盒 Chicken 1,3-βD glucosidase,1,3-βD-Glu ELISA Kit 96T/48T
鸡可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)ELISA试剂盒Chicken soluble endothelial protein C receptor,sEPCR ELISA Kit96T/48T
兔双氢睾酮(DHT)ELISA试剂盒 Rabbit Dihydro testosterone,DHT ELISA Kit96T/48T
兔核因子κB亚基p65亲和肽(NF-κB p65)ELISA试剂盒Rabbit nuclear factor-κB p65,NF-κB p65 ELISA Kit96T/48T
兔粒细胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA试剂盒Rabbit Granulocyte Colony Stimulating Factor,G-CSF ELISA Kit 96T/48T
兔血清淀粉样蛋白A(SAA)ELISA试剂盒Rabbit Serum amyloid A,SAA ELISA Kit96T/48T
兔结合珠蛋白/触珠蛋白(Hpt/HP)ELISA试剂盒Rabbit Haptoglobin,Hpt/HP ELISA Kit96T/48T
兔子α2抗纤溶酶(α2-AP)ELISA试剂盒 Rabbit α2-Antiplasmin,α2-AP ELISA Kit96T/48T
兔子纤溶酶原(Plg)ELISA试剂盒 Rabbit Plasminogen,Plg ELISA Kit96T/48T
兔骨形成蛋白(BMPs)ELISA试剂盒 Rabbit bone morphogenetic proteins,BMPs ELISA Kit 96T/48T
兔骨保护素(OPG)ELISA试剂盒 Rabbit Osteoprotegerin,OPG ELISA Kit 96T/48T
兔胰淀素(Amylin)ELISA试剂盒 Rabbit Amylin ELISA Kit 96T/48T
兔心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)ELISA试剂盒Rabbit cardiac troponin Ⅰ,cTn-ⅠELISA Kit96T/48T
兔核因子κB受体活化因子配基(RANKL)ELISA试剂盒 Rabbit receptor activator of nuclear factor kappa B ligand,RANKL ELISA Kit 96T/48T
兔乳铁传递蛋白/乳铁蛋白(LF/LTF)ELISA试剂盒 Rabbit Lactoferrin,LTF/LF ELISA Kit96T/48T
兔心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)ELISA试剂盒 Rabbit cardiac isoform of Tropnin T,cTnT ELISA Kit96T/48T
兔溶菌酶(LZM)ELISA试剂盒 Rabbit Lysozyme,LZM ELISA Kit96T/48T
兔子催乳素(PRL)ELISA试剂盒Rabbit prolactin,PRL ELISA Kit96T/48T
兔子促黄体激素(LH)ELISA试剂盒 Rabbit luteotropic hormone,LH ELISA Kit96T/48T
兔抗脑组织抗体(ABAb)ELISA试剂盒 Rabbit anti-brain tissue antibody,ABAb ELISA Kit 96T/48T