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长效期 SDS-PAGE 上样液1mL
点击次数:226发布时间:2017/1/12 13:24:27
更新日期:2022/8/17 11:57:28
所 在 地:中国大陆
产品型号:
优质供应
详细内容
长效期 SDS-PAGE 上样液1mL原理及特点:
重组蛋白 N 端的 GST 谷胱甘肽 S 转移酶(Glutathione S Transferase)能提高重组蛋白的水溶性,所以常用于蛋白质重组表达。GST-谷胱甘肽亲和层析是利用 GST 标记的蛋白能与谷胱甘肽层析介质结合,并能被还原型谷胱甘肽洗脱的特点而建立,是目前分离纯化 GST 标记蛋白质的重要方法。本产品就是专门用于上述目的,具有下列
特点:
1. 一站式套装,含所需的谷胱甘肽介质、溶液和层析柱,用户只需要提供表达 GST 标记蛋白的细菌(酵母、杆状病毒、培养细胞)即可,非常方便。
2. 专一性强,一次过柱即可获得纯度高达 95%的 GST-标记蛋白。
3. 只能在非变性条件下使用,只可用于纯化没形成包涵体的 GST 标记蛋白。
4. 每次可以处理 20 mL 的表达菌液,适合初步筛选和鉴定。
5. 提供 4 mL 浓度为 50%的谷胱甘肽-Agarose 介质,可吸附 5-10 mgGST 标记蛋白质。
6. 本介质可以反复使用多次。
长效期 SDS-PAGE 上样液1mL一:重组蛋白的表达和细菌收集
1. 37℃振荡培养 20 mL 含表达质粒的细菌到 OD600=0.6-0.8。
2. 加 IPTG 到终浓度为 0.1 mM,30℃振荡培养 3 小时或 22℃振荡培养 8小时(或过夜)。
3. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液,弃上清。
4. 用 1×PBS 缓冲液重悬细菌沉淀,4℃ 5000 g 离心 10 分钟,弃上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。
二:细胞裂解
5. 如果用本产品 A 型,用 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液(1 mL 1×PBS 缓冲液+50 uL 溶液 A+ 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液)重悬细菌沉淀,冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索,一般选 1K-10K 频率处理 15 次,每次20 秒,间隔 1 分钟(必需放置在冰上)。裂解物不能粘稠,否则会堵塞
层析柱。
6. 如果用本产品 B 型,在 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液(在 20 mL1×PBS 缓冲液中加入所有 30 mg 溶菌酶干粉,溶解后分装成 1 mL/管,取一管使用,剩余的-20℃放置)中加入 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液和 1 uL Benzonase,用此混合液重悬细菌沉淀后冰上放置 30 分钟,得到细菌裂解物。
7. 将超声或酶法细胞裂解物在 13000 g 4℃离心 10 分钟去除未裂解细胞和裂解细胞碎片以防堵柱,所得上清即含可溶性 GST 标记蛋白。
长效期 SDS-PAGE 上样液1mL三:层析柱的制备和 GST 蛋白纯化
8. 摇晃将谷胱甘肽-Agarose 介质充分混匀后,取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中(介质用量需要根据 GST 蛋白产量决定,100 mL 菌液一般使用 200 uL 介质即可)。下列步骤各溶液的用量均针对 200 uL 介质而定,如果介质用量不同,各溶液用量需相应调整。
9. 用 5 mL 预冷的 1×PBS 缓冲液洗柱。
10.将第 7 步得到的上清液(含可溶性 GST 标记蛋白)上柱,让重力使上柱液自然流出,收集并保存穿透液用于 SDS-PAGE 电泳。GST 和谷胱甘肽之间的结合很缓慢,所以流速一定不能快,否则结合不充分。流速一般在 0.2-1 mL/分钟即可。如要提高 GST 标记蛋白与介质的结合效率,可用本试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上,让细菌裂解液和介质在4℃结合 30 分钟或过夜。也可以将穿透液反复上柱。
11.用 0.5-2 mL 1×PBS 缓冲液洗柱,收集并保存穿透液(含杂蛋白)。
12.用 0.2-1 mL GST 洗脱液洗柱,收集并保存穿透液(含 GST 标记蛋白)。由于可能含蛋白酶污染,所以穿透液不能在 4℃放置,需立即用于后续处理(如浓度测定或 SDS-PAGE 电泳)或-80℃长期放置。
13.对收集的 2 种穿透液和洗脱液进行蛋白定量或 SDS-PAGE 分析。注意:如果不预先脱盐,则只能用 Bradford 法或 OD 检测法(1 OD280 约等于 0.5 mg/mL 蛋白)测定穿透液和洗脱液的蛋白浓度。由于 GST 的分子量为 26 KD,所以在 SDS-PAGE 胶上,GST 标记蛋白将比天然蛋白大 26 KD。
猪内皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)elisa试剂盒Porcine Endothelial nitric oxide synthase 3,eNOS-3 ELISA Kit96T/48T
猪血管生成素2(ANG-2)ELISA试剂盒Porcine Angiopoietin 2,ANG-2 ELISA Kit96T/48T
猪血管生成素受体/含免疫球蛋白样环和上皮生长因子样域酪氨酸激酶2(Tie-2)ELISA试剂盒Porcine tyrosine kinase with immunoglobulin-like and EGF-like domains 2,Tie-2 ELISA Kit96T/48T
猪血管生成素1(ANG-1)ELISA试剂盒Porcine Angiopoietin 1,ANG-1 ELISA Kit96T/48T
猪乙酰胆碱受体抗体(AChRab)ELISA试剂盒Porcine acetylcholine receptor antibody,AChRab ELISA Kit96T/48T
猪热休克蛋白90(HSP-90)ELISA试剂盒Porcine Heat Shock Protein 90,HSP-90 ELISA Kit96T/48T
猪热休克蛋白70(HSP-70)ELISA试剂盒Porcine Heat Shock Protein 70,HSP-70 ELISA Kit96T/48T
猪热休克蛋白40(HSP-40)ELISA试剂盒Porcine Heat Shock Protein 40,HSP-40 ELISA Kit96T/48T
猪热休克蛋白20(HSP-20)ELISA试剂盒Porcine Heat Shock Protein 20,HSP-20 ELISA Kit96T/48T
猪C反应蛋白(CRP)ELISA试剂盒Porcine C-reactive protein,CRP ELISA Kit96T/48T
猪可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)ELISA试剂盒Porcine Soluble Intercellular Adhesion Molecule-1,sICAM-1 ELISA Kit96T/48T
猪主要组织相容性复合体Ⅱ类(MHCⅡ/SLAⅡ)ELISA试剂盒swine major histocompatibility complexⅡ,MHCⅡ/SLAⅡ ELISA Kit96T/48T
猪可溶性P选择素(sP-Selectin)ELISA试剂盒Porcine soluble P-selectin,sP-Selectin ELISA Kit96T/48T
猪白介素17(IL-17)ELISA试剂盒Porcine interleukin 17,IL-17 ELISA Kit96T/48T
猪髓磷脂碱性蛋白(MBP)ELISA试剂盒Porcine myelin basic protein,MBP ELISA Kit96T/48T
猪生长激素释放多肽(GHRP)ELISA试剂盒Porcine Growth Hormone Releasing Peptide,GHRP ELISA Kit96T/48T
猪α干扰素(IFN-α)ELISA试剂盒 Porcine Interferon α,IFN-α ELISA Kit96T/48T
猪磷酸化细胞外信号调节激酶(pERK)ELISA试剂盒Porcine phospho-extracellular signal-regulated kinase,pERK ELISA Kit96T/48T
长效期 SDS-PAGE 上样液1mL猪乙酰胆碱(ACh)ELISA试剂盒Porcine acetylcholine,ACH ELISA Kit96T/48T
猪主要组织相容性复合体Ⅲ类(MHCⅢ/SLAⅢ)ELISA试剂盒swine major histocompatibility complexⅢ,MHCⅢ/SLAⅢ ELISA Kit96T/48T
猪肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)ELISA试剂盒Porcine Pulmonary surfatcant-associated protein A,SP-A ELISA Kit96T/48T
猪雌二醇受体(ER)ELISA试剂盒Porcine Estradiol receptor,ER ELISA Kit96T/48T
猪补体蛋白3(C3)ELISA试剂盒Porcine Complement 3,C3 ELISA Kit96T/48T
猪骨钙素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)ELISA试剂盒Porcine Osteocalcin/Bone gla protein,OT/BGP ELISA Kit96T/48T
猪肾上腺素(EPI)ELISA试剂盒Porcine Epinephrine/Adrenaline,EPI ELISA Kit96T/48T
猪脂蛋白α(Lp-α)ELISA试剂盒Porcine lipoprotein α,Lp-α ELISA Kit96T/48T
猪促甲状腺素释放激素(TRH)ELISA试剂盒Porcine thyrotropin-releasing hormone,TRH ELISA Kit96T/48T
猪抗凝血酶受体(ATR)ELISA试剂盒Porcine anti-thrombin receptor,ATR ELISA Kit96T/48T
猪组胺(HIS)ELISA试剂盒Porcine Histamine,HIS ELISA Kit96T/48T
猪雌二醇(E2)ELISA试剂盒Porcine Estradiol,E2 ELISA Kit96T/48T
猪转化生长因子β1(TGF-β1)ELISA试剂盒Porcine transforming growth factor β1,TGF-β1 ELISA Kit96T/48T
猪肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒Porcine tumor necrosis factor α,TNF-α ELISA Kit96T/48T
猪脂联素(ADP)ELISA试剂盒Porcine adiponectin,ADP ELISA Kit96T/48T
猪载脂蛋白B100(apo-B100)ELISA试剂盒Porcine apoprotein B100,apo-B100 ELISA Kit96T/48T
猪载脂蛋白A1(apo-A1)ELISA试剂盒Porcine apoprotein A1,apo-A1 ELISA Kit96T/48T
猪胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)ELISA试剂盒Porcine insulin-like growth factors binding protein 3,IGFBP-3 ELISA Kit96T/48T
猪胰岛素样生长因子2(IGF-2)ELISA试剂盒Porcine insulin-like growth factors 2,IGF-2 ELISA Kit96T/48T
猪胰岛素样生长因子1(IGF-1)ELISA试剂盒Porcine insulin-like growth factors-1,IGF-1 ELISA Kit96T/48T
猪胰岛素(INS)ELISA试剂盒Porcine Insulin,INS ELISA Kit96T/48T
猪血小板活化因子(PAF)ELISA试剂盒Porcine platelet activating factor,PAF ELISA Kit96T/48T
猪血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA试剂盒Porcine Vascuolar cell adhesion molecule 1,VCAM-1 ELISA Kit96T/48T
猪血纤蛋白原(Fbg)ELISA试剂盒Porcine Fibrinogen,Fbg ELISA Kit96T/48T
猪透明质酸(HA)ELISA试剂盒Porcine Hyaluronic acid,HA ELISA Kit96T/48T
猪瘦素(LEP)ELISA试剂盒Porcine Leptin,LEP ELISA Kit96T/48T
猪生长抑素(SS)ELISA试剂盒Porcine Somatostatin,SS ELISA Kit96T/48T
猪生长激素(GH)ELISA试剂盒Porcine growth hormone,GH ELISA Kit96T/48T
猪皮质酮/肾上腺酮(CORT)ELISA试剂盒Porcine Corticosterone,CORT ELISA Kit96T/48T
猪皮质醇(Cortisol)ELISA试剂盒Porcine Cortisol ELISA Kit96T/48T
猪脑钠素/脑钠尿肽(BNP)ELISA试剂盒Porcine brain natriuretic peptide,BNP ELISA Kit96T/48T
猪内皮素1(ET-1)ELISA试剂盒Porcine endothelin 1,ET-1 ELISA Kit96T/48T
猪免疫球蛋白M(IgM)ELISA试剂盒Porcine Immunoglobulin M,IgM ELISA Kit96T/48T
猪免疫球蛋白G(IgG)ELISA试剂盒Porcine Immunoglobulin G,IgG ELISA Kit96T/48T
猪免疫球蛋白E(IgE)ELISA试剂盒Porcine Immunoglobulin E,IgE ELISA Kit96T/48T
猪可溶性血管细胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA试剂盒Porcine soluble Vascuolar cell adhesion molecules 1,sVCAM-1 ELISA Kit96T/48T
猪巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISA试剂盒Porcine macrophage inflammatory protein 1α,MIP-1α ELISA Kit96T/48T
猪角化细胞生长因子(KGF)ELISA试剂盒Porcine Keratinocyte Growth Factor,KGF ELISA Kit96T/48T
猪基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA试剂盒Porcine tissue inhibitors of metalloproteinase 1,TIMP-1 ELISA Kit96T/48T
猪基质金属蛋白酶9(MMP-9)ELISA试剂盒 Porcine matrix metalloproteinase 9,MMP-9 ELISA Kit96T/48T
猪睾酮(T)ELISA试剂盒Porcine Testoterone,T ELISA Kit96T/48T
猪肝细胞生长因子(HGF)ELISA试剂盒Porcine hepatocyte growth factor,HGF ELISA Kit96T/48T
猪γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒 Porcine Interferon γ ,IFN-γ ELISA Kit96T/48T
猪端粒酶(TE)ELISA试剂盒Porcine telomerase,TE ELISA Kit96T/48T
猪促生长激素释放激素(GHRH)ELISA试剂盒Porcine growth hormone releasing hormone,GHRH ELISA Kit96T/48T
猪促卵泡素(FSH)ELISA试剂盒Porcine Follicle-stimulating hormone,FSH ELISA Kit96T/48T
猪Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)ELISA试剂盒Porcine Carboxyterminal propeptide of type Ⅰ procollagen,PⅠCP ELISA Kit96T/48T