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长效期 SDS-PAGE 电泳液 ( 干粉 )(>30KD)20L
点击次数:199发布时间:2017/1/12 13:25:16
更新日期:2022/8/17 11:57:28
所 在 地:中国大陆
产品型号:
优质供应
详细内容
长效期 SDS-PAGE 电泳液 ( 干粉 )(>30KD)20L原理及特点:
重组蛋白 N 端的 GST 谷胱甘肽 S 转移酶(Glutathione S Transferase)能提高重组蛋白的水溶性,所以常用于蛋白质重组表达。GST-谷胱甘肽亲和层析是利用 GST 标记的蛋白能与谷胱甘肽层析介质结合,并能被还原型谷胱甘肽洗脱的特点而建立,是目前分离纯化 GST 标记蛋白质的重要方法。本产品就是专门用于上述目的,具有下列
特点:
1. 一站式套装,含所需的谷胱甘肽介质、溶液和层析柱,用户只需要提供表达 GST 标记蛋白的细菌(酵母、杆状病毒、培养细胞)即可,非常方便。
2. 专一性强,一次过柱即可获得纯度高达 95%的 GST-标记蛋白。
3. 只能在非变性条件下使用,只可用于纯化没形成包涵体的 GST 标记蛋白。
4. 每次可以处理 20 mL 的表达菌液,适合初步筛选和鉴定。
5. 提供 4 mL 浓度为 50%的谷胱甘肽-Agarose 介质,可吸附 5-10 mgGST 标记蛋白质。
6. 本介质可以反复使用多次。
一:重组蛋白的表达和细菌收集
1. 37℃振荡培养 20 mL 含表达质粒的细菌到 OD600=0.6-0.8。
2. 加 IPTG 到终浓度为 0.1 mM,30℃振荡培养 3 小时或 22℃振荡培养 8小时(或过夜)。
3. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液,弃上清。
4. 用 1×PBS 缓冲液重悬细菌沉淀,4℃ 5000 g 离心 10 分钟,弃上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。
长效期 SDS-PAGE 电泳液 ( 干粉 )(>30KD)20L二:细胞裂解
5. 如果用本产品 A 型,用 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液(1 mL 1×PBS 缓冲液+50 uL 溶液 A+ 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液)重悬细菌沉淀,冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索,一般选 1K-10K 频率处理 15 次,每次20 秒,间隔 1 分钟(必需放置在冰上)。裂解物不能粘稠,否则会堵塞
层析柱。
6. 如果用本产品 B 型,在 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液(在 20 mL1×PBS 缓冲液中加入所有 30 mg 溶菌酶干粉,溶解后分装成 1 mL/管,取一管使用,剩余的-20℃放置)中加入 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液和 1 uL Benzonase,用此混合液重悬细菌沉淀后冰上放置 30 分钟,得到细菌裂解物。
7. 将超声或酶法细胞裂解物在 13000 g 4℃离心 10 分钟去除未裂解细胞和裂解细胞碎片以防堵柱,所得上清即含可溶性 GST 标记蛋白。
三:层析柱的制备和 GST 蛋白纯化
8. 摇晃将谷胱甘肽-Agarose 介质充分混匀后,取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中(介质用量需要根据 GST 蛋白产量决定,100 mL 菌液一般使用 200 uL 介质即可)。下列步骤各溶液的用量均针对 200 uL 介质而定,如果介质用量不同,各溶液用量需相应调整。
9. 用 5 mL 预冷的 1×PBS 缓冲液洗柱。
10.将第 7 步得到的上清液(含可溶性 GST 标记蛋白)上柱,让重力使上柱液自然流出,收集并保存穿透液用于 SDS-PAGE 电泳。GST 和谷胱甘肽之间的结合很缓慢,所以流速一定不能快,否则结合不充分。流速一般在 0.2-1 mL/分钟即可。如要提高 GST 标记蛋白与介质的结合效率,可用本试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上,让细菌裂解液和介质在4℃结合 30 分钟或过夜。也可以将穿透液反复上柱。
11.用 0.5-2 mL 1×PBS 缓冲液洗柱,收集并保存穿透液(含杂蛋白)。
12.用 0.2-1 mL GST 洗脱液洗柱,收集并保存穿透液(含 GST 标记蛋白)。由于可能含蛋白酶污染,所以穿透液不能在 4℃放置,需立即用于后续处理(如浓度测定或 SDS-PAGE 电泳)或-80℃长期放置。
13.对收集的 2 种穿透液和洗脱液进行蛋白定量或 SDS-PAGE 分析。注意:如果不预先脱盐,则只能用 Bradford 法或 OD 检测法(1 OD280 约等于 0.5 mg/mL 蛋白)测定穿透液和洗脱液的蛋白浓度。由于 GST 的分子量为 26 KD,所以在 SDS-PAGE 胶上,GST 标记蛋白将比天然蛋白大 26 KD。
大鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)elisa试剂盒Rat Granulocyte-Macrophage Colony Stimulating Factor,GM-CSF ELISA Kit96T/48T
大鼠胶质细胞系来源的神经营养因子(GDNF)ELISA试剂盒Rat glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF ELISA Kit96T/48T
大鼠趋化因子(fractalkine/CX3CL1)ELISA试剂盒Rat Fractalkine/CX3CL1 ELISA Kit96T/48T
大鼠纤连蛋白(FN)ELISA试剂盒 Rat Fibronectin,FN ELISA Kit96T/48T
大鼠睫状神经营养因子(CNTF)ELISA试剂盒Rat Ciliary Neurotrophic Factor,CNTF ELISA Kit96T/48T
大鼠骨成型蛋白受体Ⅱ(BMPR-Ⅱ)ELISA试剂盒Rat Bone morphogenetic protein receptor Ⅱ,BMPR-Ⅱ ELISA Kit96T/48T
大鼠骨成型蛋白受体1A(BMPR-1A)ELISA试剂盒Rat Bone morphogenetic protein receptor 1A,BMPR-1A ELISA Kit96T/48T
大鼠骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA试剂盒Rat Bone morphogenetic protein 4,BMP-4 ELISA Kit96T/48T
大鼠骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA试剂盒Rat Bone morphogenetic protein 2,BMP-2 ELISA Kit96T/48T
大鼠脑源性神经营养因子(BDNF)ELISA试剂盒Rat Brain derived neurotrophic facor,BDNF ELISA Kit96T/48T
长效期 SDS-PAGE 电泳液 ( 干粉 )(>30KD)20L大鼠活化素A(ACV-A)ELISA试剂盒Rat Activin A,ACV-A ELISA Kit96T/48T
大鼠血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA试剂盒Rat angiotension Ⅱ,ANG-Ⅱ ELISA Kit96T/48T
大鼠血管紧张素转化酶(ACE)ELISA试剂盒Rat Angiotensin converting enzyme,ACE ELISA Kit96T/48T
大鼠巨噬细胞炎症蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISA试剂盒Rat macrophage inflammatory protein 1α,MIP-1α ELISA Kit96T/48T
大鼠巨噬细胞炎症蛋白1β(MIP-1β/CCL4)ELISA试剂盒 Rat macrophage inflammatory protein 1β,MIP-1β ELISA Kit96T/48T
大鼠一氧化氮(NO)ELISA试剂盒Rat nitric oxide,NO ELISA Kit96T/48T
大鼠P选择素(P-Selectin/CD62P)ELISA试剂盒 Rat P-Selectin ELISA Kit96T/48T
大鼠核因子κB抑制蛋白α(IKBα)ELISA试剂盒 Rat inhibitory subunit of NF-κBα,IKBα ELISA Kit96T/48T
猪低氧诱导因子1α(HIF-1α)ELISA试剂盒 Procine hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α ELISA Kit96T/48T
猪钠-葡萄糖共转运载体1(GSLT1)ELISA试剂盒Porcine sodium-glucose cotransporter 1,GSLT1 ELISA Kit96T/48T
猪松弛肽/松弛素(RLN)ELISA试剂盒Porcine Relaxin,RLN ELISA Kit96T/48T
猪流感病毒A(FLU A)ELISA试剂盒Porcine Influenza viruses A,FLU A ELISA Kit96T/48T
猪孕激素/孕酮(PROG)ELISA试剂盒Porcine Progesterone,PROG ELISA Kit96T/48T
猪白介素-5(IL-5)ELISA试剂盒Porcine Interleukin 5,IL-5 ELISA Kit96T/48T
猪层连蛋白/板层素(LN)ELISA试剂盒Porcine Laminin,LN ELISA Kit96T/48T
猪Ⅱ型胶原(Col Ⅱ) ELISA试剂盒 Porcine Collagen Type Ⅱ,Col Ⅱ ELISA Kit96T/48T
猪可溶性E选择素(sE-selectin)ELISA试剂盒 Porcine soluble E-selectin,sE-selectin ELISA Kit96T/48T
猪白介素13(IL-13)ELISA试剂盒 Porcine Interleukin 13,IL-13 ELISA Kit96T/48T
猪转化生长因子β2(TGF-β2)ELISA试剂盒 Porcine Transforming Growth factor β2,TGF-β2 ELISA Kit96T/48T
猪E选择素(E-Selectin/CD62E)ELISA试剂盒Porcine E-Selectin ELISA Kit96T/48T
猪褪黑素(MT)ELISA试剂盒Porcine Melatonin,MT ELISA Kit96T/48T
猪白介素12(IL-12/P40)ELISA试剂盒Porcine Interleukin 12,IL-12/P40 ELISA Kit96T/48T
猪流行性腹泻病毒抗体(PEDV)ELISA试剂盒Porcine epidemic diarrhea virus antibody,PEDV ELISA Kit96T/48T
猪传染性胃肠炎病毒抗体(TGEV)ELISA试剂盒Porcine Transmissible Gastroenteritis virus antibody,TGEV ELISA Kit96T/48T
猪心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)ELISA试剂盒Porcine cardiac troponin Ⅰ,cTn-ⅠELISA Kit96T/48T
猪葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)ELISA试剂盒 Porcine Glucose transporter 2,GLUT2 ELISA Kit96T/48T
猪二胺氧化酶(DAO)ELISA试剂盒Porcine diamine oxidase,DAO ELISA Kit96T/48T
猪胆囊收缩素/肠促胰酶肽(CCK)ELISA试剂盒 Porcine cholecystokinin,CCK ELISA Kit96T/48T
猪肠三叶因子(ITF)ELISA试剂盒Porcine Intestinal trefoil factor,ITF ELISA Kit96T/48T
猪活化素A(ACV-A)ELISA试剂盒 Porcine Activin A,ACV-A ELISA Kit96T/48T
猪主要组织相容性复合体Ⅰ类(MHCⅠ/SLAⅠ)ELISA试剂盒 swine major histocompatibility complexⅠ,MHCⅠ/SLAⅠ ELISA Kit96T/48T
猪β干扰素(IFN-β/IFNB)ELISA试剂盒 Porcine Interferon β,IFN-β/IFNB ELISA Kit96T/48T
猪食欲素受体(OXR)ELISA试剂盒Porcine Orexin receptor,OXR ELISA Kit96T/48T
猪食欲素/阿立新B(OX-B)ELISA试剂盒Porcine Orexin B,OX-B ELISA Kit96T/48T
猪白介素1α(IL-1α)ELISA试剂盒 Porcine Interleukin 1α ,IL-1α ELISA Kit96T/48T
猪促胃液素受体(GsaR)ELISA试剂盒Porcine gastrin receptor,GsaR ELISA Kit96T/48T
猪生长激素释放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)ELISA试剂盒Porcine growth hormone releasing peptide-Ghrelin,GHRP-Ghrelin ELISA Kit96T/48T
猪地塞米松(Dex)ELISA试剂盒Porcine Dexamethasone,Dex ELISA Kit96T/48T
猪D二聚体(D2D)ELISA试剂盒Porcine D-Dimer,D2D ELISA Kit96T/48T
猪髓过氧化物酶(MPO)ELISA试剂盒Porcine myeloperoxidase,MPO ELISA Kit96T/48T
猪超氧化物歧化酶(SOD)ELISA试剂盒Porcine Super Oxidase Dimutase,SOD ELISA Kit96T/48T
猪血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(VWF)ELISA试剂盒Porcine von Willebrand Factor,vWF ELISA Kit96T/48T
猪黑色素瘤转移表面黏附分子(MMSAM)ELISA试剂盒Porcine melanoma metastasis surface adhesion molecule,MMSAM ELISA Kit96T/48T
猪可溶性血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2/sFLK-1)ELISA试剂盒Porcine soluble vascular endothelial growth factor receptor-2,VEGFR-2/sFLK-1 ELISA Kit96T/48T
猪血管内皮钙粘着蛋白复合体(VE-cad)ELISA试剂盒Porcine Vascular Endothelial-Cadherin Complex,VE-cad ELISA Kit96T/48T
猪去甲肾上腺素(NE)ELISA试剂盒Porcine Noradrenaline,NE ELISA Kit96T/48T
猪血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA试剂盒 Porcine angiotension Ⅱ,ANG-Ⅱ ELISA Kit96T/48T
猪凋亡相关因子(FAS/CD95)ELISA试剂盒 Porcine Factor-related Apoptosis,FAS ELISA Kit96T/48T
猪B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)ELISA试剂盒Porcine B-cell leukemia/lymphoma 2,Bcl-2 ELISA Kit96T/48T
猪Bcl-2相关X蛋白(BAX)ELISA试剂盒 Porcine Bcl-2 Assaciated X protein,BAX ELISA Kit96T/48T
猪一氧化氮(NO)ELISA试剂盒Porcine nitric oxide,NO ELISA Kit96T/48T
猪内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)ELISA试剂盒Porcine Endothelial nitric oxide synthase,eNOS ELISA Kit96T/48T