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一站式 Tricine-SDS-PAGE 套装30 次
点击次数:348发布时间:2017/1/12 13:26:30
更新日期:2022/8/17 11:57:28
所 在 地:中国大陆
产品型号:
优质供应
详细内容
一站式 Tricine-SDS-PAGE 套装30 次原理及特点:
重组蛋白 N 端的 GST 谷胱甘肽 S 转移酶(Glutathione S Transferase)能提高重组蛋白的水溶性,所以常用于蛋白质重组表达。GST-谷胱甘肽亲和层析是利用 GST 标记的蛋白能与谷胱甘肽层析介质结合,并能被还原型谷胱甘肽洗脱的特点而建立,是目前分离纯化 GST 标记蛋白质的重要方法。本产品就是专门用于上述目的,具有下列
特点:
1. 一站式套装,含所需的谷胱甘肽介质、溶液和层析柱,用户只需要提供表达 GST 标记蛋白的细菌(酵母、杆状病毒、培养细胞)即可,非常方便。
2. 专一性强,一次过柱即可获得纯度高达 95%的 GST-标记蛋白。
3. 只能在非变性条件下使用,只可用于纯化没形成包涵体的 GST 标记蛋白。
4. 每次可以处理 20 mL 的表达菌液,适合初步筛选和鉴定。
5. 提供 4 mL 浓度为 50%的谷胱甘肽-Agarose 介质,可吸附 5-10 mgGST 标记蛋白质。
6. 本介质可以反复使用多次。
一:重组蛋白的表达和细菌收集
1. 37℃振荡培养 20 mL 含表达质粒的细菌到 OD600=0.6-0.8。
2. 加 IPTG 到终浓度为 0.1 mM,30℃振荡培养 3 小时或 22℃振荡培养 8小时(或过夜)。
3. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液,弃上清。
4. 用 1×PBS 缓冲液重悬细菌沉淀,4℃ 5000 g 离心 10 分钟,弃上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。
一站式 Tricine-SDS-PAGE 套装30 次二:细胞裂解
5. 如果用本产品 A 型,用 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液(1 mL 1×PBS 缓冲液+50 uL 溶液 A+ 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液)重悬细菌沉淀,冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索,一般选 1K-10K 频率处理 15 次,每次20 秒,间隔 1 分钟(必需放置在冰上)。裂解物不能粘稠,否则会堵塞
层析柱。
6. 如果用本产品 B 型,在 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液(在 20 mL1×PBS 缓冲液中加入所有 30 mg 溶菌酶干粉,溶解后分装成 1 mL/管,取一管使用,剩余的-20℃放置)中加入 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液和 1 uL Benzonase,用此混合液重悬细菌沉淀后冰上放置 30 分钟,得到细菌裂解物。
7. 将超声或酶法细胞裂解物在 13000 g 4℃离心 10 分钟去除未裂解细胞和裂解细胞碎片以防堵柱,所得上清即含可溶性 GST 标记蛋白。
三:层析柱的制备和 GST 蛋白纯化
8. 摇晃将谷胱甘肽-Agarose 介质充分混匀后,取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中(介质用量需要根据 GST 蛋白产量决定,100 mL 菌液一般使用 200 uL 介质即可)。下列步骤各溶液的用量均针对 200 uL 介质而定,如果介质用量不同,各溶液用量需相应调整。
9. 用 5 mL 预冷的 1×PBS 缓冲液洗柱。
10.将第 7 步得到的上清液(含可溶性 GST 标记蛋白)上柱,让重力使上柱液自然流出,收集并保存穿透液用于 SDS-PAGE 电泳。GST 和谷胱甘肽之间的结合很缓慢,所以流速一定不能快,否则结合不充分。流速一般在 0.2-1 mL/分钟即可。如要提高 GST 标记蛋白与介质的结合效率,可用本试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上,让细菌裂解液和介质在4℃结合 30 分钟或过夜。也可以将穿透液反复上柱。
11.用 0.5-2 mL 1×PBS 缓冲液洗柱,收集并保存穿透液(含杂蛋白)。
12.用 0.2-1 mL GST 洗脱液洗柱,收集并保存穿透液(含 GST 标记蛋白)。由于可能含蛋白酶污染,所以穿透液不能在 4℃放置,需立即用于后续处理(如浓度测定或 SDS-PAGE 电泳)或-80℃长期放置。
13.对收集的 2 种穿透液和洗脱液进行蛋白定量或 SDS-PAGE 分析。注意:如果不预先脱盐,则只能用 Bradford 法或 OD 检测法(1 OD280 约等于 0.5 mg/mL 蛋白)测定穿透液和洗脱液的蛋白浓度。由于 GST 的分子量为 26 KD,所以在 SDS-PAGE 胶上,GST 标记蛋白将比天然蛋白大 26 KD。
大鼠含免疫球蛋白样环和上皮生长因子样域酪氨酸激酶2(Tie-2)elisa试剂盒Rat tyrosine kinase with immunoglobulin-like and EGF-like domains 2,Tie-2 ELISA Kit96T/48T
大鼠基质金属蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)ELISA试剂盒Rat tissue inhibitors of metalloproteinase 2,TIMP-2 ELISA Kit96T/48T
大鼠基质金属蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)ELISA试剂盒Rat tissue inhibitors of metalloproteinase 3,TIMP-3 ELISA Kit96T/48T
大鼠基质金属蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)ELISA试剂盒Rat tissue inhibitors of metalloproteinase 4,TIMP-4 ELISA Kit96T/48T
大鼠肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA试剂盒Rat Tumor necrosis factor soluble receptor Ⅰ,TNFsR-Ⅰ ELISA Kit96T/48T
大鼠肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)ELISA试剂盒Rat Tumor necrosis factor soluble receptor Ⅱ,TNFsR-Ⅱ ELISA Kit96T/48T
大鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β)ELISA试剂盒Rat Tumor necrosis factor β,TNF-β ELISA Kit96T/48T
大鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体1(TRAIL-R1)ELISA试剂盒Rat tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand 1,TRAIL R1 ELISA Kit96T/48T
大鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体3(TRAIL-R3)ELISA试剂盒Rat tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand 3,TRAIL R3 ELISA Kit96T/48T
大鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体4(TRAIL-R4)ELISA试剂盒Rat tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand 4,TRAIL R4 ELISA Kit96T/48T
大鼠可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sTRAIL)ELISA试剂盒Rat soluble tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand,sTRAIL ELISA Kit96T/48T
大鼠尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)ELISA试剂盒Rat urokinase plasminogen activator,uPA ELISA Kit96T/48T
大鼠尿激酶型纤溶酶原激活物受体(PLAUR/uPAR)ELISA试剂盒Rat Urokinase-type Plasminogen Activator Receptor,PLAUR/uPAR ELISA Kit96T/48T
大鼠白介素12(IL-12/P70)ELISA试剂盒Rat Interleukin 12,IL-12/P70 ELISA Kit96T/48T
大鼠血管内皮细胞生长因子B(VEGF-B)ELISA试剂盒Rat Vascular Endothelial cell Growth Factor B,VEGF-B ELISA Kit96T/48T
大鼠白介素12(IL-12/P40)ELISA试剂盒Rat Interleukin 12,IL-12/P40 ELISA Kit96T/48T
大鼠血管内皮细胞生长因子C(VEGF-C)ELISA试剂盒Rat Vascular Endothelial cell Growth Factor C,VEGF-C ELISA Kit96T/48T
大鼠白介素11(IL-11)ELISA试剂盒Rat Interleukin 11,IL-11 ELISA Kit96T/48T
大鼠胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP-4)ELISA试剂盒Rat Insulin-like growth factor binding protein 4,IGFBP-4 ELISA Kit96T/48T
大鼠胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)ELISA试剂盒Rat Insulin-like growth factor binding protein 3,IGFBP-3 ELISA Kit96T/48T
大鼠血管内皮细胞生长因子D(VEGF-D)ELISA试剂盒Rat Vascular Endothelial cell Growth Factor D,VEGF-D ELISA Kit96T/48T
大鼠胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFBP-2)ELISA试剂盒Rat Insulin-like growth factor binding protein 2,IGFBP-2 ELISA Kit96T/48T
大鼠血管内皮细胞生长因子受体1(VEGFR-1/Flt1)ELISA试剂盒Rat Vascuoar endothelial cell growth factor receptor 1,VEGFR-1/Flt1 ELISA Kit96T/48T
大鼠胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP-1)ELISA试剂盒 Rat Insulin-like growth factor binding protein 1,IGFBP-1 ELISA Kit96T/48T
大鼠血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR-2/Flk-1)ELISA试剂盒Rat Vascuoar endothelial cell growth factor receptor 2,VEGFR-2/Flk-1 ELISA Kit96T/48T
大鼠肝细胞生长因子(HGF)ELISA试剂盒Rat hepatocyte growth factor,HGF ELISA Kit96T/48T
大鼠糖蛋白130(gp130)ELISA试剂盒Rat glucoprotein 130,gp130 ELISA Kit96T/48T
大鼠生长激素(GH)ELISA试剂盒Rat growth hormone,GH ELISA Kit96T/48T
大鼠粒细胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA试剂盒Rat Granulocyte Colony Stimulating Factor,G-CSF ELISA Kit96T/48T
大鼠中性粒细胞趋化蛋白2(NAP-2/CXCL7)ELISA试剂盒Rat neutrophil activating protein-2,NAP-2 ELISA Kit96T/48T
大鼠FMS样酪氨酸激酶3(Flt3)ELISA试剂盒Rat FMS-like tyrosine kinase 3,Flt3 ELISA Kit96T/48T
一站式 Tricine-SDS-PAGE 套装30 次大鼠FMS样酪氨酸激酶3配体(Flt3L)ELISA试剂盒Rat FMS-like tyrosine kinase 3 ligand,Flt-3L ELISA Kit96T/48T
大鼠碱性成纤维细胞生长因子9(bFGF-9)ELISA试剂盒Rat basic fibroblast growth factor 9,bFGF-9 ELISA Kit96T/48T
大鼠碱性成纤维细胞生长因子4(bFGF-4)ELISA试剂盒Rat basic fibroblast growth factor 4,bFGF-4 ELISA Kit96T/48T
大鼠碱性成纤维细胞生长因子6(bFGF-6)ELISA试剂盒Rat basic fibroblast growth factor 6,bFGF-6 ELISA Kit96T/48T
大鼠酸性成纤维细胞生长因子1(aFGF-1)ELISA试剂盒Rat acidic fibroblast growth factor 1,aFGF-1 ELISA Kit96T/48T
大鼠凋亡相关因子配体(FASL) ELISA试剂盒 Rat Factor-related Apoptosis ligand,FASL ELISA Kit96T/48T
大鼠凋亡相关因子(FAS/CD95)ELISA试剂盒Rat Factor-related Apoptosis,FAS ELISA Kit96T/48T
大鼠红细胞生成素(EPO)ELISA试剂盒 Rat Erythropoietin,EPO ELISA Kit96T/48T
大鼠红细胞生成素受体(EPOR)ELISA试剂盒Rat Erythropoietin receptor,EPOR ELISA Kit96T/48T
大鼠嗜酸粒细胞趋化蛋白Eotaxin 1(Eotaxin 1/CCL11)ELISA试剂盒 Rat Eotaxin 1 ELISA Kit96T/48T
大鼠嗜酸粒细胞趋化因子(ECF)ELISA试剂盒Rat eosinophil chemotactic factor,ECF ELISA Kit96T/48T
大鼠内分泌腺来源的血管内皮生长因子(EG-VEGF)ELISA试剂盒Rat Endocrine gland vascular endothelial growth factor,EG-VEGF ELISA Kit96T/48T
大鼠1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)ELISA试剂盒 Rat 1,3-βD glucosidase,1,3-βD-Glu ELISA Kit96T/48T
大鼠可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)ELISA试剂盒Rat soluble endothelial protein C receptor,sEPCR ELISA Kit96T/48T
大鼠CD30分子(CD30)ELISA试剂盒Rat Cluster of differentiation 30,CD30 ELISA Kit96T/48T
大鼠E钙黏蛋白/上皮钙黏蛋白(E-Cad)ELISA试剂盒Rat Epithelial-Cadherin,E-Cad ELISA Kit96T/48T
大鼠β细胞素(BTC)ELISA试剂盒 Rat beta cellulin,BTC ELISA Kit 96T/48T
大鼠血管生成素2(ANG-2)ELISA试剂盒Rat Angiopoietin 2,ANG-2 ELISA Kit96T/48T
大鼠血管生成素1(ANG-1)ELISA试剂盒Rat Angiopoietin 1,ANG-1 ELISA Kit96T/48T
大鼠血管生长素(ANG)ELISA试剂盒Rat Angiogenin,ANG ELISA Kit96T/48T
大鼠角化细胞内分泌因子(KAF)/双调蛋白(AR)ELISA试剂盒Rat keratinocyte autocrine factor/Amphiregulin,KAF/AR ELISA Kit96T/48T
大鼠环磷酸腺苷(cAMP)ELISA试剂盒Rat cyclic adenosine monophosphate,cAMP ELISA Kit96T/48T
大鼠白细胞活化黏附因子(ALCAM)ELISA试剂盒Rat Activated Leukocyte Cell Adhesion Molecule,ALCAM ELISA Kit96T/48T
大鼠白介素9(IL-9)ELISA试剂盒Rat Interleukin 9,IL-9 ELISA Kit96T/48T
大鼠巨噬细胞移动抑制因子(MIF)ELISA试剂盒Rat Macrophage Migration Inhibitory Factor,MIF ELISA Kit96T/48T
大鼠转化生长因子α(TGF-α)ELISA试剂盒Rat transforming growth factor α,TGF-α ELISA Kit96T/48T
大鼠孕激素/孕酮(PROG)ELISA试剂盒Rat Progesterone,PROG ELISA Kit96T/48T
大鼠雌激素(E)ELISA试剂盒Rat estrogen,E ELISA Kit96T/48T
大鼠血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA试剂盒 Rat Vascuolar cell adhesion molecule 1,VCAM-1 ELISA Kit96T/48T
大鼠白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA试剂盒Rat Interleukin 8,IL-8 ELISA Kit96T/48T
大鼠脂联素(ADP)ELISA试剂盒Rat adiponectin,ADP ELISA Kit96T/48T
大鼠游离β绒毛膜促性腺激素(f-βCG)ELISA试剂盒Rat free chorionic gonadotropin,f-βCG ELISA Kit96T/48T
大鼠醛固酮(ALD)ELISA试剂盒rat aldosterone,ALD ELISA Kit96T/48T
大鼠去甲肾上腺素(NA)ELISA试剂盒rat Noradrenaline,NA ELISA Kit 96T/48T
大鼠前列腺素F(PGF)ELISA试剂盒rat Prostaglandin F,PG-F ELISA Kit96T/48T
大鼠前列腺素E1(PGE1)ELISA试剂盒rat Prostaglandin E1,PG-E1 ELISA Kit96T/48T
大鼠皮质酮/肾上腺酮(CORT)ELISA试剂盒rat Corticosterone,CORT ELISA Kit96T/48T
大鼠内皮素1(ET-1)ELISA试剂盒rat Endothelin 1,ET-1 ELISA Kit96T/48T
大鼠血管舒缓激肽(BK)ELISA试剂盒Rat bradykinin,BK ELISA Kit96T/48T