一站式 Blue Native PAGE 电泳套装30 次二：细胞裂解

5. 如果用本产品 A 型，用 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液（1 mL 1×PBS 缓冲液+50 uL 溶液 A+ 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液）重悬细菌沉淀，冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索，一般选 1K-10K 频率处理 15 次，每次20 秒，间隔 1 分钟（必需放置在冰上）。裂解物不能粘稠，否则会堵塞
层析柱。
6. 如果用本产品 B 型，在 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液（在 20 mL1×PBS 缓冲液中加入所有 30 mg 溶菌酶干粉，溶解后分装成 1 mL/管，取一管使用，剩余的-20℃放置）中加入 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液和 1 uL Benzonase，用此混合液重悬细菌沉淀后冰上放置 30 分钟，得到细菌裂解物。
7. 将超声或酶法细胞裂解物在 13000 g 4℃离心 10 分钟去除未裂解细胞和裂解细胞碎片以防堵柱，所得上清即含可溶性 GST 标记蛋白。
三：层析柱的制备和 GST 蛋白纯化
8. 摇晃将谷胱甘肽-Agarose 介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 GST 蛋白产量决定，100 mL 菌液一般使用 200 uL 介质即可）。下列步骤各溶液的用量均针对 200 uL 介质而定，如果介质用量不同，各溶液用量需相应调整。
9. 用 5 mL 预冷的 1×PBS 缓冲液洗柱。
10.将第 7 步得到的上清液（含可溶性 GST 标记蛋白）上柱，让重力使上柱液自然流出，收集并保存穿透液用于 SDS-PAGE 电泳。GST 和谷胱甘肽之间的结合很缓慢，所以流速一定不能快，否则结合不充分。流速一般在 0.2-1 mL/分钟即可。如要提高 GST 标记蛋白与介质的结合效率，可用本试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上，让细菌裂解液和介质在4℃结合 30 分钟或过夜。也可以将穿透液反复上柱。
11.用 0.5-2 mL 1×PBS 缓冲液洗柱，收集并保存穿透液（含杂蛋白）。
12.用 0.2-1 mL GST 洗脱液洗柱，收集并保存穿透液（含 GST 标记蛋白）。由于可能含蛋白酶污染，所以穿透液不能在 4℃放置，需立即用于后续处理（如浓度测定或 SDS-PAGE 电泳）或-80℃长期放置。
13.对收集的 2 种穿透液和洗脱液进行蛋白定量或 SDS-PAGE 分析。注意：如果不预先脱盐，则只能用 Bradford 法或 OD 检测法（1 OD280 约等于 0.5 mg/mL 蛋白）测定穿透液和洗脱液的蛋白浓度。由于 GST 的分子量为 26 KD，所以在 SDS-PAGE 胶上，GST 标记蛋白将比天然蛋白大 26 KD。
原理及特点:
重组蛋白 N 端的 GST 谷胱甘肽 S 转移酶（Glutathione S Transferase）能提高重组蛋白的水溶性，所以常用于蛋白质重组表达。GST-谷胱甘肽亲和层析是利用 GST 标记的蛋白能与谷胱甘肽层析介质结合，并能被还原型谷胱甘肽洗脱的特点而建立，是目前分离纯化 GST 标记蛋白质的重要方法。本产品就是专门用于上述目的，具有下列
一站式 Blue Native PAGE 电泳套装30 次特点：
1. 一站式套装，含所需的谷胱甘肽介质、溶液和层析柱，用户只需要提供表达 GST 标记蛋白的细菌（酵母、杆状病毒、培养细胞）即可，非常方便。
2. 专一性强，一次过柱即可获得纯度高达 95%的 GST-标记蛋白。
3. 只能在非变性条件下使用，只可用于纯化没形成包涵体的 GST 标记蛋白。
4. 每次可以处理 20 mL 的表达菌液，适合初步筛选和鉴定。
5. 提供 4 mL 浓度为 50%的谷胱甘肽-Agarose 介质，可吸附 5-10 mgGST 标记蛋白质。
6. 本介质可以反复使用多次。
一:重组蛋白的表达和细菌收集
1. 37℃振荡培养 20 mL 含表达质粒的细菌到 OD600=0.6-0.8。
2. 加 IPTG 到终浓度为 0.1 mM，30℃振荡培养 3 小时或 22℃振荡培养 8小时（或过夜）。
3. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液，弃上清。
4. 用 1×PBS 缓冲液重悬细菌沉淀，4℃ 5000 g 离心 10 分钟，弃上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。

大鼠氧化低密度脂蛋白(OxLDL)elisa试剂盒Rat oxidized lowdensity lipoprotein,OxLDL ELISA Kit 96T/48T

大鼠血小板活化因子(PAF)ELISA试剂盒Rat platelet activating factor,PAF ELISA Kit96T/48T

大鼠Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNT)ELISA试剂盒Rat procollagen Ⅲ N-terminal peptide,PⅢNT ELISA Kit 96T/48T

大鼠Ⅲ型胶原(Col Ⅲ)ELISA试剂盒Rat Collagen Type Ⅲ,Col Ⅲ ELISA Kit96T/48T

大鼠C反应蛋白(CRP)ELISA试剂盒Rat C-Reactive Protein,CRP ELISA Kit96T/48T

大鼠组织多肽抗原(TPA)ELISA试剂盒Rat Tissue Polypeptide Antigen,TPA ELISA Kit96T/48T

大鼠组织型纤溶酶原激活剂(t-PA) ELISA试剂盒 Rat Tissue-type Plasiminogen Actilyse,t-PA ELISA Kit96T/48T

大鼠组织因子(TF)ELISA试剂盒Rat Tissue factor,TF ELISA Kit96T/48T

大鼠维生素D(VD)ELISA试剂盒Rat Vitamin D,VD ELISA Kit96T/48T

大鼠维生素K1(VK1)ELISA试剂盒Rat Vitamin K1,VK1 ELISA Kit96T/48T

大鼠维生素B12(VB12)ELISA试剂盒Rat Vitamin B12,VB12 ELISA Kit96T/48T

大鼠维生素D3(VD3)ELISA试剂盒Rat Vitamin D3,VD3 ELISA Kit96T/48T

大鼠维生素D2(VD2)ELISA试剂盒Rat Vitamin D2,VD2 ELISA Kit96T/48T

大鼠维生素E(VE)ELISA试剂盒Rat Vitamin E,VE ELISA Kit96T/48T

大鼠维生素A(VA)ELISA试剂盒Rat Vitamin A,VA ELISA Kit96T/48T

大鼠β血小板球蛋白/β血栓环蛋白(β-TG)ELISA试剂盒Rat β-Thromboglobulin,β-TG ELISA Kit96T/48T

大鼠血小板因子4(PF-4/CXCL4)ELISA试剂盒 Rat Platelet Factor 4,PF-4 ELISA Kit96T/48T

大鼠双氢睾酮(DHT)ELISA试剂盒Rat Dihydrotestosterone,DHT ELISA Kit96T/48T

大鼠结缔组织生长因子(CTGF)ELISA试剂盒Rat connective tissue growth factor,CTGF ELISA Kit96T/48T

大鼠抗精子抗体(AsAb)ELISA试剂盒Rat anti-sperm antibody,AsAb ELISA Kit96T/48T

大鼠甲状旁腺激素(PTH) ELISA试剂盒 Rat Parathyroid hormone,PTH ELISA Kit96T/48T

大鼠组胺(HIS)ELISA试剂盒Rat Histamine,HIS ELISA Kit96T/48T

大鼠白介素13(IL-13)ELISA试剂盒Rat Interleukin 13,IL-13 ELISA Kit96T/48T

大鼠白介素15(IL-15)ELISA试剂盒Rat Interleukin 15,IL-15 ELISA Kit 96T/48T

大鼠白介素16(IL-16)ELISA试剂盒Rat Interleukin 16,IL-16 ELISA Kit 96T/48T

大鼠白介素17(IL-17)ELISA试剂盒Rat Interleukin 17,IL-17 ELISA Kit 96T/48T

大鼠白介素1可溶性受体Ⅰ(IL-1sRⅠ)ELISA试剂盒Rat soluble interleukin-1 receptor Ⅰ,IL-1sRⅠ ELISA Kit 96T/48T

大鼠可溶性E选择素(sE-selectin)ELISA试剂盒Rat soluble E-selectin,sE-selectin ELISA Kit96T/48T

大鼠白介素1可溶性受体Ⅱ(IL-1sRⅡ)ELISA试剂盒Rat soluble interleukin-1 receptor Ⅱ,IL-1sRⅡ ELISA Kit 96T/48T

大鼠17羟皮质类固醇(17-OHCS)ELISA试剂盒Rat 17-Hydroxycorticosteroids,17-OHCS ELISA Kit 96T/48T

大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA试剂盒Rat N-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAG ELISA Kit 96T/48T

大鼠17-酮类固醇(17-KS)ELISA试剂盒Rat 17-ketosteroids,17-KS ELISA Kit 96T/48T

大鼠白介素2可溶性受体α链(IL-2sRα/CD25)ELISA试剂盒Rat soluble interleukin-2 receptor,IL-2sRα ELISA Kit96T/48T

大鼠白介素2可溶性受体β链(IL-2sRβ)ELISA试剂盒Rat soluble interleukin-2 receptor,IL-2sRβ ELISA Kit 96T/48T

大鼠白介素3(IL-3)ELISA试剂盒Rat Interleukin 3,IL-3 ELISA Kit 96T/48T

大鼠白介素5(IL-5)ELISA试剂盒Rat Interleukin 5,IL-5 ELISA Kit 96T/48T

大鼠苗条素受体(LR/Ob-R)ELISA试剂盒Rat Leptin receptor,LR/Ob-R ELISA Kit96T/48T

大鼠瘦素(LEP)ELISA试剂盒Rat Leptin,LEP ELISA Kit 96T/48T

大鼠白血病抑制因子(LIF)ELISA试剂盒Rat leukemia inhibitory factor,LIF ELISA Kit96T/48T

一站式 Blue Native PAGE 电泳套装30 次大鼠L选择素(L-Selectin/CD62L)ELISA试剂盒Rat L-Selectin ELISA Kit 96T/48T

大鼠单核细胞趋化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA试剂盒Rat monocyte chemotactic protein 1/monocyte chemotactic ａnd activating factor,MCP-1/MCAF ELISA Kit96T/48T

大鼠单核细胞趋化蛋白2(MCP-2/CCL8)ELISA试剂盒Rat monocyte chemotactic protein 2,MCP-2 ELISA Kit 96T/48T

大鼠单核细胞趋化蛋白3(MCP-3/CCL7)ELISA试剂盒Rat monocyte chemotactic protein 3,MCP-3 ELISA Kit 96T/48T

大鼠巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA试剂盒Rat Macrophage Colony-Stimulating Factor,M-CSF ELISA Kit 96T/48T

大鼠巨噬细胞来源的趋化因子(MDC/CCL22)ELISA试剂盒Rat Macrophage-Derived Chemokine,MDC ELISA Kit 96T/48T

大鼠巨噬细胞炎性蛋白2(MIP-2)ELISA试剂盒Rat macrophage inflammatory protein 2,MIP-2 ELISA Kit96T/48T

大鼠巨噬细胞炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)ELISA试剂盒Rat macrophage inflammatory protein 3β,MIP-3β ELISA Kit96T/48T

大鼠基质金属蛋白酶1(MMP-1)ELISA试剂盒 Rat matrix metalloproteinase 1,MMP-1 ELISA Kit96T/48T

大鼠基质金属蛋白酶10(MMP-10)ELISA试剂盒Rat matrix metalloproteinase 10,MMP-10 ELISA Kit96T/48T

大鼠基质金属蛋白酶13(MMP-13)ELISA试剂盒Rat matrix metalloproteinase 13,MMP-13 ELISA Kit96T/48T

大鼠基质金属蛋白酶2/明胶酶A(MMP-2/Gelatinase A)ELISA试剂盒 Rat matrix metalloproteinase 2/Gelatinase A,MMP-2 ELISA Kit96T/48T

大鼠基质金属蛋白酶3(MMP-3)ELISA试剂盒 Rat matrix metalloproteinase 3,MMP-3 ELISA Kit 96T/48T

大鼠基质金属蛋白酶7(MMP-7)ELISA试剂盒Rat matrix metalloproteinase 7,MMP-7 ELISA Kit96T/48T

大鼠基质金属蛋白酶8/中性粒细胞胶原酶(MMP-8)ELISA试剂盒Rat matrix metalloproteinase 8/Neutrophil collagenase,MMP-8 ELISA Kit96T/48T

大鼠5核苷酸酶(5-NT)ELISA试剂盒Rat 5-Nucleotidase,5-NT ELISA Kit96T/48T

大鼠骨保护素(OPG)ELISA试剂盒Rat Osteoprotegerin,OPG ELISA Kit96T/48T

大鼠B因子(BF)ELISA试剂盒Rat factor B,BF ELISA Kit96T/48T

大鼠抑瘤素M(OSM)ELISA试剂盒Rat Oncostatin-M,OSM ELISA Kit96T/48T

大鼠胎盘生长因子(PLGF)ELISA试剂盒Rat placenta growth factor,PLGF ELISA Kit96T/48T

大鼠正常T细胞表达和分泌因子(RANTES/CCL5)ELISA试剂盒 Rat regulated on activation in normal T-cell expressed ａnd secreted,RANTES ELISA Kit96T/48T

大鼠L苯丙氨酸解氨酶(PAL)ELISA试剂盒Rat L-Phenylalanine ammonla-lyase,PAL ELISA Kit96T/48T

大鼠可溶性CD30配体(sCD30L)ELISA试剂盒Rat Soluble Cluster of differentiation 30 ligand,sCD30L ELISA Kit96T/48T

大鼠可溶性CD40配体(sCD40L)ELISA试剂盒 Rat Soluble Cluster of differentiation 40 ligand,sCD40L ELISA Kit96T/48T

大鼠干细胞因子受体(SCFR)ELISA试剂盒Rat Stem Cell Factor Receptor,SCFR ELISA Kit96T/48T

大鼠基质细胞衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)ELISA试剂盒 Rat Stromal cell derived factor 1β,SDF-1β ELISA Kit96T/48T

大鼠血管生成素受体Tie1(ANG-R-Tie1)ELISA试剂盒Rat angiopoietin receptor Tie1,ANG-R-Tie1 ELISA Kit96T/48T