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Tricine-SDS-PAGE 配胶液250mL

点击次数:328发布时间:2017/1/12 13:28:45

Tricine-SDS-PAGE 配胶液250mL

更新日期:2022/8/17 11:57:28

所 在 地:中国大陆

产品型号:

简单介绍:Tricine-SDS-PAGE 配胶液250mL温运输和保存,溶菌酶、Benzonase 和 PMSF 需低温运输。收到货后,介质需 4℃保存,溶菌酶、Benzonase 和 PMSF 需-20℃保存,有效期一年。

相关标签:蛋白质研究 

优质供应

详细内容

Tricine-SDS-PAGE 配胶液250mL原理及特点:
重组蛋白 N 端的 GST 谷胱甘肽 S 转移酶(Glutathione S Transferase)能提高重组蛋白的水溶性,所以常用于蛋白质重组表达。GST-谷胱甘肽亲和层析是利用 GST 标记的蛋白能与谷胱甘肽层析介质结合,并能被还原型谷胱甘肽洗脱的特点而建立,是目前分离纯化 GST 标记蛋白质的重要方法。本产品就是专门用于上述目的,具有下列
特点:
1. 一站式套装,含所需的谷胱甘肽介质、溶液和层析柱,用户只需要提供表达 GST 标记蛋白的细菌(酵母、杆状病毒、培养细胞)即可,非常方便。
2. 专一性强,一次过柱即可获得纯度高达 95%的 GST-标记蛋白。
3. 只能在非变性条件下使用,只可用于纯化没形成包涵体的 GST 标记蛋白。
4. 每次可以处理 20 mL 的表达菌液,适合初步筛选和鉴定。
5. 提供 4 mL 浓度为 50%的谷胱甘肽-Agarose 介质,可吸附 5-10 mgGST 标记蛋白质。
6. 本介质可以反复使用多次。
一:重组蛋白的表达和细菌收集
1. 37℃振荡培养 20 mL 含表达质粒的细菌到 OD600=0.6-0.8。
2. 加 IPTG 到终浓度为 0.1 mM,30℃振荡培养 3 小时或 22℃振荡培养 8小时(或过夜)。
3. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液,弃上清。
4. 用 1×PBS 缓冲液重悬细菌沉淀,4℃ 5000 g 离心 10 分钟,弃上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。
Tricine-SDS-PAGE 配胶液250mL二:细胞裂解
5. 如果用本产品 A 型,用 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液(1 mL 1×PBS 缓冲液+50 uL 溶液 A+ 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液)重悬细菌沉淀,冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索,一般选 1K-10K 频率处理 15 次,每次20 秒,间隔 1 分钟(必需放置在冰上)。裂解物不能粘稠,否则会堵塞
层析柱。
6. 如果用本产品 B 型,在 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液(在 20 mL1×PBS 缓冲液中加入所有 30 mg 溶菌酶干粉,溶解后分装成 1 mL/管,取一管使用,剩余的-20℃放置)中加入 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液和 1 uL Benzonase,用此混合液重悬细菌沉淀后冰上放置 30 分钟,得到细菌裂解物。
7. 将超声或酶法细胞裂解物在 13000 g 4℃离心 10 分钟去除未裂解细胞和裂解细胞碎片以防堵柱,所得上清即含可溶性 GST 标记蛋白。
三:层析柱的制备和 GST 蛋白纯化
8. 摇晃将谷胱甘肽-Agarose 介质充分混匀后,取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中(介质用量需要根据 GST 蛋白产量决定,100 mL 菌液一般使用 200 uL 介质即可)。下列步骤各溶液的用量均针对 200 uL 介质而定,如果介质用量不同,各溶液用量需相应调整。
9. 用 5 mL 预冷的 1×PBS 缓冲液洗柱。
10.将第 7 步得到的上清液(含可溶性 GST 标记蛋白)上柱,让重力使上柱液自然流出,收集并保存穿透液用于 SDS-PAGE 电泳。GST 和谷胱甘肽之间的结合很缓慢,所以流速一定不能快,否则结合不充分。流速一般在 0.2-1 mL/分钟即可。如要提高 GST 标记蛋白与介质的结合效率,可用本试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上,让细菌裂解液和介质在4℃结合 30 分钟或过夜。也可以将穿透液反复上柱。
11.用 0.5-2 mL 1×PBS 缓冲液洗柱,收集并保存穿透液(含杂蛋白)。
12.用 0.2-1 mL GST 洗脱液洗柱,收集并保存穿透液(含 GST 标记蛋白)。由于可能含蛋白酶污染,所以穿透液不能在 4℃放置,需立即用于后续处理(如浓度测定或 SDS-PAGE 电泳)或-80℃长期放置。
13.对收集的 2 种穿透液和洗脱液进行蛋白定量或 SDS-PAGE 分析。注意:如果不预先脱盐,则只能用 Bradford 法或 OD 检测法(1 OD280 约等于 0.5 mg/mL 蛋白)测定穿透液和洗脱液的蛋白浓度。由于 GST 的分子量为 26 KD,所以在 SDS-PAGE 胶上,GST 标记蛋白将比天然蛋白大 26 KD。

大鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)elisa试剂盒Rat dipeptidyl peptldase Ⅳ,DPPⅣ ELISA Kit96T/48T

大鼠过敏毒素/补体片断4a(C4a)ELISA试剂盒t Complement fragment 4a,C4a ELISA Kit96T/48T

大鼠补体片断5a(C5a)ELISA试剂盒Rat Complement fragment 5a,C5a ELISA Kit96T/48T

大鼠补体片断3a(C3a)ELISA试剂盒Rat Complement fragment 3a,C3a ELISA Kit96T/48T

大鼠卵泡抑素(FS)ELISA试剂盒Rat Follistatin,FS ELISA Kit96T/48T

大鼠组织蛋白去乙酰化酶(HD)ELISA试剂盒 Rat Histone Deacetylase,HD ELISA Kit 96T/48T

大鼠E选择素(E-Selectin/CD62E)ELISA试剂盒Rat E-Selectin ELISA Kit 96T/48T

大鼠甲基化酶(Methylase)ELISA试剂盒Rat Methylase ELISA Kit96T/48T

大鼠抗增殖细胞核抗原抗体(PCNA)ELISA试剂盒Rat proliferating cell nuclear antigen antibody,PCNA ELISA Kit96T/48T

大鼠脂蛋白脂酶(LPL)ELISA试剂盒Rat lipoprotein lipase,LPL ELISA Kit96T/48T

大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)ELISA试剂盒Rat tartrate-resistant acid phosphatase 5b,TRACP-5b ELISA Kit96T/48T

大鼠葡萄糖依赖性胰岛素释放多肽(GIP)ELISA试剂盒Rat Glucose-dependent insulin-releasing polypeptide,GIP ELISA Kit96T/48T

大鼠糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)ELISA试剂盒Rat Glycogen phosphorylase II,GP-II ELISA Kit96T/48T

大鼠糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)ELISA试剂盒Rat Glycogen phosphorylase MM,GP-MM ELISA Kit96T/48T

大鼠糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)ELISA试剂盒Rat Glycogen phosphorylase BB,GP-BB ELISA Kit96T/48T

大鼠甲状腺素抗体(TAb)ELISA试剂盒Rat Thyroxine antibody,TAb ELISA Kit96T/48T

大鼠抗促甲状腺素受体抗体(TRAb)ELISA试剂盒Rat thyroid stimulating hormone receptor antidoby,TRAb ELISA Kit96T/48T

大鼠儿茶酚胺(CA)ELISA试剂盒Rat catecholamine,CA ELISA Kit96T/48T

大鼠白介素27(IL-27)ELISA试剂盒Rat Interleukin 27,IL-27 ELISA Kit96T/48T

大鼠白介素23(IL-23)ELISA试剂盒Rat Interleukin 23,IL-23 ELISA Kit 96T/48T

大鼠心肌营养素1(CT-1)ELISA试剂盒Rat cardiotrophln 1,CT-1 ELISA Kit96T/48T

大鼠抗α-胞衬蛋白抗体IgG/IgA(α-Fodrin IgG/IgA)ELISA试剂盒Rat anti-alpha-Fodrin IgG/IgA,α-Fodrin IgG/IgA ELISA Kit 96T/48T

大鼠脂蛋白α(Lp-α)ELISA试剂盒Rat lipoprotein α,Lp-α ELISA Kit96T/48T

大鼠凝血因子Ⅷ相关抗原(FⅧ-Ag)ELISA试剂盒Rat coagulation factor Ⅷ related antigen,FⅧ-Ag ELISA Kit96T/48T

大鼠凝血因子IX(FIX)ELISA试剂盒Rat Fcoagulation factor Ⅸ,FⅨ ELISA KitRat Fcoagulation factor Ⅸ,FⅨ ELISA Kit96T/48T

大鼠凝血因子Ⅹ(FⅩ)ELISA试剂盒Rat coagulation factor Ⅹ,FⅩ ELISA Kit96T/48T

大鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(VWF)ELISA试剂盒Rat von Willebrand Factor,vWF ELISA Kit96T/48T

大鼠纤溶酶抗纤溶酶复合物(PAP)ELISA试剂盒Rat plasmin-antiplasmin complex,PAP ELISA Kit96T/48T

大鼠凝血酶抗凝血酶复合物(TAT)ELISA试剂盒Rat thrombin-antithrombin complex,TAT ELISA Kit96T/48T

大鼠抗凝血酶受体(ATR)ELISA试剂盒Rat anti-thrombin receptor,ATR ELISA Kit96T/48T

大鼠凝血酶受体(TR)ELISA试剂盒Rat thrombin receptor,TR ELISA Kit96T/48T

大鼠心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)ELISA试剂盒Rat cardiac troponin Ⅰ,cTn-Ⅰ ELISA Kit96T/48T

大鼠磷酸肌醇3激酶(PI3K)ELISA试剂盒Rat Phosphotylinosital 3 kinase,PI3K ELISA Kit96T/48T

大鼠蛋白激酶B(PKB)ELISA试剂盒Rat protein kinase B,PKB ELISA Kit96T/48T

大鼠分泌型免疫球蛋白A(sIgA)ELISA试剂盒Rat secretory immunoglobulin A,sIgA ELISA Kit96T/48T

Tricine-SDS-PAGE 配胶液250mL大鼠血红素氧合酶2(HO-2)ELISA试剂盒Rat heme oxygenase 2,HO-2 ELISA Kit96T/48T

大鼠骨胶原交联(Cr)ELISA试剂盒Rat Crosslaps,Cr ELISA Kit96T/48T

大鼠Ⅰ型前胶原C末端肽(CⅠCP)ELISA试剂盒Rat cross-linked C-telopeptides of Type Ⅰ collagen,CⅠCP ELISA Kit96T/48T

大鼠脱氧吡啶酚/脱氧吡啶啉(DPD)ELISA试剂盒Rat deoxypyridinoline,DPD ELISA Kit 96T/48T

大鼠吡啶交联物(PY)ELISA试剂盒Rat pyridinium crosslink/PyriLinks,PY ELISA Kit96T/48T

大鼠骨桥素(OPN)ELISA试剂盒Rat Osteopontin,OPN ELISA Kit96T/48T

大鼠骨特异性碱性磷酸酶B(ALP-B)ELISA试剂盒Rat Bone-specific Alkphase B,ALP-B ELISA Kit96T/48T

大鼠转铁蛋白受体(TFR/CD71)ELISA试剂盒Rat transferrin receptor,TFR ELISA Kit96T/48T

大鼠半胱氨酸蛋白酶抑制剂/胱抑素C(Cys-C)ELISA试剂盒Rat Cystatin C,Cys-C ELISA Kit96T/48T

大鼠第八因子相关抗原(FⅧAg)ELISA试剂盒Rat Factor Ⅷ-related Antigen,FⅧAg ELISA Kit96T/48T

大鼠丙酮酸激酶M2型同工酶(M2-PK)ELISA试剂盒Rat Pyruvate Kinase,M2-PK ELISA Kit96T/48T

大鼠乙酰胆碱受体抗体(AChRab)ELISA试剂盒Rat acetylcholine receptor antibody,AChRab ELISA Kit96T/48T

大鼠γ氨基丁酸(GABA)ELISA试剂盒Rat Gamma-aminobutyric acid,GABA ELISA Kit96T/48T

大鼠5羟色胺(5-HT)ELISA试剂盒Rat 5-Hydroxytryptamine,5HT ELISA Kit96T/48T

大鼠P物质受体(SP-R)ELISA试剂盒Rat substance P receptor,SP-R ELISA Kit96T/48T

大鼠P物质(SP)ELISA试剂盒Rat Substance P,SP ELISA Kit96T/48T

大鼠αL岩藻糖苷酶(AFU)ELISA试剂盒Rat alpha-L-fucosidase,AFU ELISA Kit96T/48T

大鼠甲状腺过氧化物酶(TPO)ELISA试剂盒Rat Thyroid-Peroxidase,TPO ELISA Kit96T/48T

大鼠胰岛素原(PI)ELISA试剂盒Rat Proinsulin,PI ELISA Kit96T/48T

大鼠抗IgE受体抗体ELISA试剂盒Rat anti-IgE receptor antibody ELISA Kit96T/48T

大鼠抗IVIgG抗体ELISA试剂盒Rat anti-IVIgG antibody ELISA Kit96T/48T

大鼠P53(P53)ELISA试剂盒Rat p53/tumor protein,p53/TP53 ELISA Kit96T/48T

大鼠环磷酸鸟苷(cGMP)ELISA试剂盒Rat Cyclic guanosine monophosphate,cGMP ELISA Kit96T/48T

 

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  • 企业类型:经销商
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