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豚鼠免疫球蛋白A（IgA）elisa试剂盒使用说明书
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文件大小：239kb
上传时间：2017/3/2 15:29:35
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上 传 者：上海谷研实业有限公司
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豚鼠免疫球蛋白A(IgA)elisa试剂盒操作步骤：
1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
800 ng/ml 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液
400 ng/ml 4 号标准品 150μl 的 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
200 ng/ml 3 号标准品 150μl 的 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
100 ng/ml 2 号标准品 150μl 的 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
50 ng/ml 1 号标准品 150μl 的 2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl（样品*终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此
重复 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同 3。
8. 洗涤：操作同 5。
9. 显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟.
10. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值） 。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。
豚鼠免疫球蛋白A(IgA)elisa试剂盒实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中豚鼠免疫球蛋白A(IgA)水平。用纯化的豚鼠免疫球蛋白A(IgA)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入免疫球蛋白 A(IgA)，再与 HRP标记的免疫球蛋白A(IgA)抗体结合， 形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的免疫球蛋白 A(IgA)呈正相关。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中豚鼠免疫球蛋白A(IgA)浓度。
1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
800 ng/ml 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液
400 ng/ml 4 号标准品 150μl 的 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
200 ng/ml 3 号标准品 150μl 的 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
100 ng/ml 2 号标准品 150μl 的 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
50 ng/ml 1 号标准品 150μl 的 2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl（样品*终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此
重复 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同 3。
8. 洗涤：操作同 5。
9. 显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟.
10. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值） 。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。
豚鼠免疫球蛋白A(IgA)elisa试剂盒实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中豚鼠免疫球蛋白A(IgA)水平。用纯化的豚鼠免疫球蛋白A(IgA)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入免疫球蛋白 A(IgA)，再与 HRP标记的免疫球蛋白A(IgA)抗体结合， 形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的免疫球蛋白 A(IgA)呈正相关。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中豚鼠免疫球蛋白A(IgA)浓度。
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