企业档案
- 会员类型：免费会员
- 工商认证： 【已认证】
- 最后认证时间：
- 法人：
- 注册号：
- 企业类型：经销商
- 注册资金：人民币万
联系我们
联系人：刘丽丽
热门标签
资料下载
牛支原体ELISA试剂盒使用说明书
详细内容下载：
文件大小：75kb
上传时间：2017/3/7 15:05:32
文件类型：jpg
上 传 者：上海谷研实业有限公司
查看次数：154次
下载次数：285次
牛支原体elisa试剂盒实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛支原体表达。用纯化的牛支原体抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中牛支原体相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的牛支原体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中牛支原体的存在与否。
牛支原体ELISA试剂盒组成
1 20倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 3ml×1瓶
2 酶标试剂 3ml×1瓶 8 阳性对照 0.5ml×1瓶
3 酶标包被板 12孔×4条 9 阴性对照 0.5ml×1瓶
4 样品稀释液 3ml×1瓶 10 说明书 1份
5 显色剂A液 3ml×1瓶 11 封板膜 2张
6 显色剂B液 3ml×1/瓶 12 密封袋 1个
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）
2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
牛支原体ELISA试剂盒计算和结果判定：
试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10
临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15
阴性判定：样品OD值< 临界值（CUT OFF）者为牛支原体阴性
阳性判定：样品OD值≥ 临界值（CUT OFF）者为牛支原体阳性
。
牛支原体ELISA试剂盒注意事项
1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。
2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5．底物请避光保存。
6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为630nm
7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸，使用时必须注意安全。
牛支原体ELISA试剂盒保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛支原体表达。用纯化的牛支原体抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中牛支原体相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的牛支原体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中牛支原体的存在与否。
牛支原体ELISA试剂盒组成
1 20倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 3ml×1瓶
2 酶标试剂 3ml×1瓶 8 阳性对照 0.5ml×1瓶
3 酶标包被板 12孔×4条 9 阴性对照 0.5ml×1瓶
4 样品稀释液 3ml×1瓶 10 说明书 1份
5 显色剂A液 3ml×1瓶 11 封板膜 2张
6 显色剂B液 3ml×1/瓶 12 密封袋 1个
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）
2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
牛支原体ELISA试剂盒计算和结果判定：
试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10
临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15
阴性判定：样品OD值< 临界值（CUT OFF）者为牛支原体阴性
阳性判定：样品OD值≥ 临界值（CUT OFF）者为牛支原体阳性
。
牛支原体ELISA试剂盒注意事项
1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。
2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5．底物请避光保存。
6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为630nm
7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸，使用时必须注意安全。
牛支原体ELISA试剂盒保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月
相关文章
- 2017/11/14人碱性成纤维细胞生长因子ELISA检测试剂盒实验原理
- 2017/11/9人纤维连接蛋白ELISA检测试剂盒技术参数
- 2017/11/7人血小板生成素（TPO）ELISA试剂盒使用说明书
- 2017/11/2肾上腺皮质抗体（ACA）ELISA试剂盒使用说明书
- 2017/10/26大黄鱼巨噬细胞移动抑制因子酶联免疫分析试剂盒技术参数
- 2017/10/24大鼠蛋白激酶A（PKA）酶联免疫分析试剂盒说明书
- 2017/10/19人淀粉样前体蛋白酶联免疫分析试剂盒实验原理
- 2017/10/17兔白细胞介素12 （IL-12 ）ELISA试剂盒实验原理
- 2017/10/12大鼠维生素B6酶联免疫分析试剂盒说明书
- 2017/10/10大鼠肿瘤坏死因子β（TNF-β）酶联免疫分析试剂盒实验原理
