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3-硝基酪氨酸（3-NT）ELISA试剂盒使用说明书
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上传时间：2017/3/14 14:33:31
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上 传 者：上海谷研实业有限公司
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3-硝基酪氨酸（3-NT）elisa试剂盒实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中3-硝基酪氨酸(3-NT)水平。用纯化的3-硝基酪氨酸(3-NT)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入3-硝基酪氨酸(3-NT)，再与HRP标记的3-硝基酪氨酸(3-NT)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的3-硝基酪氨酸(3-NT)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中3-硝基酪氨酸(3-NT)浓度。
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
3-硝基酪氨酸（3-NT）ELISA试剂盒操作步骤
标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
120 nmol/L
5号标准品
150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
60 nmol/L
4号标准品
150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
30 nmol/L
3号标准品
150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
15 nmol/L
2号标准品
150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
7.5 nmol/L
1号标准品
150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品*终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 3-硝基酪氨酸（3-NT）ELISA试剂盒测定应在加终止液后15分钟以内进行。
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中3-硝基酪氨酸(3-NT)水平。用纯化的3-硝基酪氨酸(3-NT)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入3-硝基酪氨酸(3-NT)，再与HRP标记的3-硝基酪氨酸(3-NT)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的3-硝基酪氨酸(3-NT)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中3-硝基酪氨酸(3-NT)浓度。
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
3-硝基酪氨酸（3-NT）ELISA试剂盒操作步骤
标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
120 nmol/L
5号标准品
150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
60 nmol/L
4号标准品
150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
30 nmol/L
3号标准品
150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
15 nmol/L
2号标准品
150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
7.5 nmol/L
1号标准品
150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品*终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 3-硝基酪氨酸（3-NT）ELISA试剂盒测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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