为什么有些细胞实验无法重复？

为什么有的细胞在相当长的时间里，都养不到好状态？

为什么实验室中，超过一株以上的细胞都时好时坏？

细胞生长缓慢、细胞变形、碎片增加、悬浮细胞容易成团、培养基提前变色、镜下发现有小黑点……

如果排除了其他试剂选择不当、细胞株老化、细菌污染等原因，而仍有上述一种或几种情况，则高度提示——你的细胞可能被支原体污染了！

图. 电镜下的支原体

支原体污染普遍存在

据美国数据统计，细胞发生支原体污染的几率在70%以上。同时，由于支原体直径很小，仅在180nm~350nm之间，只有通过电镜才能看到，不易被实验者肉眼发觉，支原体污染逐渐成为一个普遍存在的问题。

支原体污染的危害

支原体污染是个循序的过程，普通抗生素对其无效。因此，支原体污染有多烦人，相信实验人都领教过了。

1、细胞状态不佳，生长速度慢，实验无法推进。

2、细胞内DNA、RNA及蛋白表达发生改变，影响实验结果，导致实验数据不准确，时间、经费的浪费。

3、一株污染的细胞成为实验室的污染源，对工作区域以及培养箱和液氮罐造成污染，进而污染其他细胞，导致其他细胞继发性污染，实验受影响，数据无法重复，预期结果出不来。

如何有效把支原体赶出细胞？

对于已耗费很多时间、大量扩增起来的细胞，或经过基因转染、体外刺激等大量工作处理过的细胞，如果发现细胞被支原体污染了，怎么办？由于前期工作量巨大，我们无法丢弃已有细胞。但由于价格原因，又无法使用那些昂贵试剂杀除细胞上的支原体，同时，实验人员还需要清除细胞上的支原体污染，让实验得以往下推进，以*终获得准确的实验数据。

实验者可选用对支原体特效的抑制剂，通过对细胞的前期处理，中期加药，逐步通过4代左右的培养，从而将支原体污染彻底清除，确保试验顺利推进，结果准确。全世界此类试剂众多，威正翔禹生物周围的实验人做过很多尝试，其中效果*确切且性价比很高的当属德国Minerva公司的ZellShield®祛除剂。

Zell Shield®是一种即用型新型复合抗生素，副作用极低，能有效地祛除细胞培养支原体、细菌、真菌污染。Zell Shield®使用方法简单，直接加入培养基中保护细胞。

它的原理：通过抑制支原体增殖中某种蛋白的合成，达到抑制新的支原体增殖的目的。属复合型的新型抗生素。它广泛适用于细胞培养相关的科研和工业领域。

特点

1、适用范围广

普通细胞培养和原代细胞培养

2、无细胞毒性

目前，Zell Shield®对多种细胞系都无细胞毒性。

3、高效广谱

祛除支原体效果明显，同时对细胞内和细胞外的革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、病原虫、真菌等污染亦可有效预防。

4、操作简便

可直接加入到预处理的培养基或细胞中进行消毒。

5、稳定性高

在细胞孵育期内，Zell Shield®始终保持稳定的活性。

6、低耐药风险

精心挑选的新型复合抗生素只有极低的耐药风险，多种抗生素联合使用几乎不会产生耐药突变株。

操作步骤：

第1步：研究发现，98%的支原体污染发生在细胞间隙。因此，首先要把细胞消化下来，放入离心管，悬浮冲洗，离心，弃上清，反复三次。此时可将细胞上大部分的支原体去除，为进一步加药抑制做好准备。

第二步：培养液中加入1%的ZellShield®，细胞进行正常培养。新的支原体增殖受到抑制，旧的支原体随着细胞的换液逐步减少，通过4代左右的培养，细胞中的支原体基本可被彻底清除。

注：使用ZellShield®时，不需使用链青霉素。

此试剂价格约2200元/50ml，可保证大量细胞的实验得以顺利推进。

总之，细胞培养中，支原体污染发生频繁。有时带来的危害会造成实验的巨大损失。应经常检测和及时排除支原体污染，让细胞在健康安全的环境下生长，为获得准确的实验结果，打下良好的基础。

原创作者：北京缔一生物科技有限公司