在疫苗生产、生物制药和细胞培养试验中，支原体污染的预防和祛除，是保证生产质量和实验顺利的重要环节。

在全qiu支原体检测和祛除领域中，近二十年一直排名首位的，是一家位于德国柏林郊外的生物厂家——德国Minerva Biolabs公司（简称德国MB）。

全qiu众多的大型生物药厂以及数不过来的生物实验室，大部分预防、检测，祛除支原体的产品，均都来自于这家MB公司。

在之前的文章中，我们已经为大家介绍了MB家族全套的『支原体检测产品系列』，其中包括荧光定量PCR方法的检测试剂盒，以及可做方法学验证的标准品等。

而本期文章，我们将把MB品牌的『支原体祛除和预防系列』产品，简明扼要地介绍给大家，希望对疫苗生产、生物制药、细胞治疗、CAR-T等项目的质检质控，以及更多实验室的科研工作者，能有所帮助。

本文共分三个部分：

一，细胞培养时，可加入培养基中的支原体清除剂。

二，工作区域中支原体污染的清除系列，同时对细菌、病毒、真菌、霉菌都有效。

三，预防培养箱水槽、水浴锅中水，不被支原体污染，同时对霉菌，孢子，细菌，真菌都有效的产品系列。

一，细胞中支原体的祛除

（一）Zell Shield®支原体祛除剂（培养基用）

1. 适用范围

（1）细胞已发生支原体污染，但又不愿丢弃，希望继续培养（如已转染或大量扩增的细胞）。

（2）初始培养的原代细胞。

（3）存在支原体污染高风险的细胞。

2. 用法：

（1）1:100加入培养基。

（2）当细胞存在支原体污染时，应先对细胞悬浮冲洗三次，再用含Zell Shield®培养基培养。每次传代前都应做悬浮冲洗处理。连续传代4次，支原体即可祛除。

（二）Mynox® Gold支原体祛除剂（珍贵细胞保种用）

1. 适用范围

被支原体污染的珍贵细胞或不易获得的生物样本（如细胞种子）。

2. 用法：

步骤1. 将「首次治疗液」加入到4.5ml培养基（FBS需≤5%）中，培养细胞（细胞数为104~105）。

步骤2. 细胞长至80%-90%汇合时，细胞传代。将1管「巩固防护液」加到9.5ml培养基中，用该培养基继续培养。

步骤3. 重复步骤2，细胞再传代2次，支原体即完全祛除。

注意：每次传代时，*hao都能把细胞悬浮冲洗三次，可取得更好的治疗效果。

（三）Mynox®支原体祛除剂（珍贵样本用）

1. 适用范围

被支原体污染的珍贵细胞、不易获得的生物样本或病毒收获液（特别是不能长期培养的样品）。

2. 用法：

（1）对于贴壁细胞：

步骤1. 培养皿中加入200μl Mynox®和 2.8ml培养基中（FBS≤5%），混匀。

步骤2. 再加入2ml细胞（细胞数为104~105，培养基中的FBS需≤5%）。

步骤3. 细胞培养2小时，弃上清，换用新鲜培养基培养4代即可。

（2）对于悬浮细胞：

步骤1. 在离心管中加入200μl Mynox®和1.6ml胰酶（0.125 %，5 mM EDTA in PBS），混匀。

步骤2. 加入1.6ml细胞（细胞数为104~105）。

步骤3. 室温静置30min。

步骤4. 600×g离心5min。弃上清，换用新鲜培养基培养4代即可。

二，工作区域中支原体的祛除

（一）MB支原体祛除喷雾

英文名: Mycoplasma-OffTM

1. 用途：实验环境（如实验台、超净台、培养箱、仪器设备）、无菌车间和洁净生产线的支原体的祛除，对清除支原体、细菌、真菌（含真菌孢子）和多种病毒污染均有效。

2. 用法：喷雾剂喷洒待消毒的表面，等待5-10min后，用干净纸巾擦拭。通风2-3分钟。

（二）MB支原体祛除湿巾

英文名：Mycoplasma-OffTM Wipes

1. 用途：应用于电子设备、门把手、电话、移液器表面的支原体的祛除，对支原体、细菌、真菌（含真菌孢子）和多种病毒均有效。

2. 用法：用湿巾擦拭后，应让被消毒物体的表面保持湿润，再让其自然风干。

三，培养箱水槽、水浴锅中支原体的预防

支原体祛除剂（水槽用）

英文名：Water ShieldTM

1. 用途：预防培养箱水槽、水浴锅的支原体、细菌和真菌污染。

2. 用法：

步骤1. 本品按1:200比例加入到蒸馏水中，如1L蒸馏水+5ml Water ShieldTM

步骤2. 加入Water ShieldTM的蒸馏水可直接加入到培养箱水槽或水浴锅中，

步骤3. 4周左右清洗水槽，换水，重新加入Water ShieldTM。

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原创作者：北京缔一生物科技有限公司