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如何检查胎牛血清中的病毒
点击次数:20772 发布时间:2020/11/18 12:42:08
胎牛血清作为天然培养基被实验室和科研单位广泛使用,它富含细胞生长中的各种营养成分,但是也容易受到病毒感染,从而给细胞培养带来潜在的干扰。
在美国,胎牛血清的病毒检查遵循着9 CFR 113.52 、9 CFR 113.53联邦法令,并以兽药委员会(CVMP)关于免疫性兽药生产中应用牛血清的指南文件(EMEA/CVMP/743/00-Rev.2)、专li药委员会(CPMP)关于生物药生产中牛血清应用指南的文件(EMEA/CPMP/BWP/1793/02)为参考,并在美国药典(USP)中有所描述。而我国在药典中目前只有有关新生牛血清的质检规定,还没有胎牛血清的内容。
在USP提到病毒检查中,建议使用两种或两种以上的细胞系作为检测细胞,其中一种细胞系应为牛源。检测时,添加15%的待测牛血清培养细胞至少21天,期间细胞至少传代两次。之后观察是否存在病毒的扩增。如用显微镜观察是否存在细胞病变效应(例如由牛鼻支气管炎病毒导致)、细胞染色和镜下包涵体检查、血吸附检查((牛副流感3型病毒),并在此基础上进行针对如下病毒的特异性的免疫荧光抗体检查:
牛病毒性腹泻病毒(BVDV)
牛细小病毒
牛腺病毒
牛兰舌病毒
牛呼吸道合胞病毒
呼肠弧病毒
狂犬病病毒
病毒还可以在电镜下观察,更直观,更全面。但电镜需要相应的仪器,样本也需要一定的制备过程。
*chang用的病毒检查方法还是免疫检查(这个特异性*gao)、血吸附检查和细胞病变效应。后两个检查是通用的病毒检查,不具有病毒特异性,且二者可以互补。一些病毒为血吸附病毒,含有血凝素(HA),可以引起红细胞的聚集;另外一些病毒则可造成细胞变性,引起受染细胞发生聚集、脱落、融合,形成包涵体,甚至损伤、死亡。这些恃征性的改变,称为细胞病变效应,它可在低倍显微镜下直接观察。
许多胎牛血清在质控证书上都会注明检查的病毒种类和结果。如Ausbian®特级胎牛血清在COA即会注明厂家开展的这些检测。
总之,确定牛血清没有病毒感染,无论对于细胞培养,还是疫苗生产,都具有非常重要的意义。
感谢缔一生物提供相关内容
原创作者:北京缔一生物科技有限公司