实验室里总会有各式各样的细胞需要培养，养细胞的会发生些囧事：不做实验的时候，细胞长得老快了；到做实验的时候，自家的细胞好像吃了瞌睡药样，昏昏欲睡，死活长不起来。

• 细胞生长缓慢；
• 细胞变形；
• 碎片增加；
• 悬浮细胞容易成团；
• 培养基提变色；
• 镜下发现有小黑点；

如果排除了其他试剂选择不当、细胞株老化、细菌污染……原因，而仍有上述种或几种情况，则高度提示：细胞可能出现了支原体污染。据报道，细胞培养中发生支原体污染的机率较高，会达到70%左右，常规抗生素的使用对支原体几乎无效。

那么，支原体污染，对细胞培养有什么危害呢？

 

支原体穿透真核细胞表面 大量支原体聚集在真核细胞表面（扫描电镜照片）

细胞被支原体污染，解决方案：

方法：确认细胞已被支原体污染，终止试验，丢弃所有被污染的细胞和耗材。

重新复苏细胞，注意选用未被污染的细胞株、血清和培养基，并规范操作。

方法二：对于珍贵的，样品不可再得的细胞，或价格昂贵的种子细胞，不但无法丢弃，而且作为种子细胞，还需要彻底根除支原体污染。

此时，需选用特异性的支原体杀除剂，清除污染，保护细胞。

目上有效的方法是是德国的款生物试剂，由Minerva公司生产，品名Mynox®。

此试剂可在2-3小时内将支原体主动杀除，但对细胞无毒害作用。特别适合细胞保种。

Mynox®为枯草杆菌中提取出的生物制剂，加入培养液中，可特异性地与支原体膜结合，改变膜通透性。通过此生物物理的方法，2～3小时内，即可把细胞中的支原体杀除掉。因为细胞膜结构与支原体膜不同，故Mynox®不会与细胞膜结合，因此无细胞毒性。

注意：3小时后，需将此试剂洗脱，将细胞更换到新的培养耗材和培养液中，重新培养。

此时，不应使用PCR方法检测细胞中支原体。由于支原体解体，故PCR结果为假性强阳性。

具体操作流程见下图：

 

Mynox®祛除贴壁细胞中支原体的流程图

Mynox®杀除支原体功能强大有效，但由于价格昂贵，上图中使用的200ul人民币要5000元左右，使得应用于细胞保种的数量受到价格的限制。

方法三：对于已耗费很多时间，大量扩增起来的细胞，或经过基因转染、体外刺激等大量工作处理过的细胞，如果发现细胞被支原体污染了，怎么办？此时由于期工作量巨大，使操作人员无法丢弃已有细胞。

但由于价格原因，又无法使用方法二提到的昂贵试剂杀除细胞上的支原体，

同时，实验人员还需要清除细胞上的支原体污染，让实验得以往下推进，以终获得准确的实验数据。

此时，实验者可选用对支原体特效的抑制剂，通过对细胞的期处理，中期加药，逐步通过4代左右的培养，得以将支原体污染彻底清除，确保试验顺利推进，结果准确。

原创作者：北京缔一生物科技有限公司