细胞传代后如果出现支原体污染，需要采取一系列措施来应对和处理。以下是一些建议的解决方案：

一、确认污染

先需要确认细胞是否确实受到了支原体的污染。可以通过以下方法进行检测：

荧光染色法：利用特异性的抗体将支原体染成荧光色，从而易于发现污染细胞。

实时定量PCR法：通过特定的引物和探针，能够准确检测出极微量的支原体DNA。

试剂盒检测法：目前已有专门做支原体检测的试剂盒,例如：德国MB 支原体pcr检测试剂盒/qpcr检测试剂盒。

二、处理污染

一旦确认细胞受到支原体污染，可以采取以下措施进行处理：

更换培养液：将受污染的培养液倒掉，换上新鲜的无菌培养液。

增加消毒剂浓度：在培养液中加入适量的消毒剂，如抗生素，以杀灭支原体。但需注意，抗生素可能对细胞本身也有一定影响，因此需要选择合适的抗生素种类和浓度。

紫外线照射：利用紫外线对培养箱和实验台进行照射消毒，减少环境中的支原体数量。

使用支原体清除试剂盒：市面上有专门针对支原体污染的清除试剂盒，可以按照说明书进行操作。

反复悬浮冲洗和离心：通过反复悬浮冲洗和离心，可以去除细胞表面和细胞间隙中的部分支原体。结合使用特定的支原体祛除剂（如Zell Shield），可以更有 效地抑制支原体的增殖。

三、预防再次污染

为了预防细胞再次受到支原体污染，可以采取以下措施：

严格无菌操作：在进行细胞培养过程中，必须严格遵守无菌操作规程，包括穿戴专门的工作服和鞋子、对所有实验器具进行消毒、在实验前后对实验室进行彻 底的清洁和消毒等。

使用支原体检测合格的细胞株：在细胞传代前，应对细胞株进行支原体检测，确保使用无支原体污染的细胞株。

控制环境污染：保持实验室环境的清洁和无菌，定期对环境进行检测和消毒。

在培养基中加入适量的抗生素：在细胞培养基中加入适量的抗生素，以预防支原体的污染。但需注意，长 期使用抗生素可能会对细胞本身产生不利影响，因此需要权衡利弊。

四、其他注意事项

在处理支原体污染时，应尽量避免将污染细胞与其他细胞或实验材料接触，以防止交叉污染。

如果细胞系受到严重污染且无法恢复，可能需要考虑丢弃该细胞系并重新培养新的细胞系。

综上所述，细胞传代后出现支原体污染需要采取一系列措施来应对和处理。通过确认污染、处理污染和预防再次污染等措施的综合应用，可以有 效地减少支原体对细胞培养的影响。

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