注意事项

1. 选择适当得细胞接种浓度和培养时间。

2. 设置调零孔（只加培养基100ul、MTT10ul、二甲基亚砜100ul）。

3. 设置空白孔（细胞、药物溶解介质、培养液共100ul、10ulMTT 、100ul二甲基亚砜）。

4. MTT实验吸光度zui后要在0-0.7之间，超出这个范围就不是直线关系。

5. 96孔板边缘32孔用无菌PBS填充，因为边缘的32孔中水分蒸发很快，药物易被浓缩，对实验影响大。同时加入PBS液填充后，可以一定程度上保持中间孔的水分。

6. 防止药物与MTT反应。

如果96孔板中加入了具有氧化还原性的药物，比如谷胱甘肽、Vit E、VitC，那建议用PBS将细胞洗洗，否则这些药物会将MTT还原成棕褐色沉淀，这种效果可能是不需要的。

7. 吸收值分析

在理想的MTT实验中，如果是细胞抑制实验，不加药物处理的空白组的吸收值应该在0.8-1.2左右，太小检测误差占的比例较多，太大吸收值可能已经超出线性范围。这个原理在朗伯-比尔定律中有解释。

8. 培养过程中换液

100ul的培养液对于10的4～5次方的增殖期细胞来说，很难维持50h以上，如果营养不够的话，细胞会由增殖期渐渐趋向G0期而趋于静止，影响结果。如果培养时间长，在48h应该换液一次。

9. 避免血清干扰

高的血清物质会影响试验孔的光吸收值。由于试验本底增加，会试验敏感性。因此，一般选小于10％胎牛血清的培养液进行。在呈色后，尽量吸净培养孔内残余培养液。

10. 判断污染

如加入MTT后都有个别孔立即变为蓝黑色，则污染的可能性極大。在加MTT可以先在镜下观察，看看是否有孔染菌，染菌的孔常常是临近的。

11. 加DMSO要把液体小心吸掉

但培养液里的紫色结晶可能会吸去，可在这之先用平板离心机离心96孔板，2000r，5分钟，然后吸掉上清(如果是悬浮细胞，则推荐此法，悬浮细胞要离心2500rpm×10min.且其做MTThao用圆底型96孔板，清除上清时注意不要把下面的结晶颗粒吸掉。对于贴壁细胞，可以试着将96孔板倾斜30度角，然后用枪尖慢慢吸。

12. MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。在用酶标仪检测结果的时候，为了baozheng实验结果的线性，MTT 吸光度zui好在0-0.7 范围内。MTT一般zui好现用现配，过滤后4ºC避光保存两周内有效，或配制成5mg/ml保存在-20度chang期保存，避免反复冻融，zui好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。一般都把MTT粉分装在EP管里，用的时候现配，直接往培养板中加，没必要一下子配那么多，尤其当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了。MTT有致癌性，用的时候小心，有条件zui好带那种透明的簿膜手套.配成的MTT需要无菌，MTT对菌很敏感；往96孔板加时不避光也没有关系，毕竟时间较短，或者不放心的时候可以把操作台上的照明灯关掉。
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