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技术文章
Mouse TBA ELISA Kit操作方法
点击次数：141 发布时间：2018/2/6 17:10:13
小鼠总胆汁酸(TBA)elisa试剂盒
英文名称：Mouse TBA ELISA Kit
实验类型：夹心法
检测范围：0.5 μmol/L – 16 μmol/L
检测限：0.1 μmol/L
应用范围：血清、血浆、组织匀浆、细胞培养物上清或其它相关液体（本产品仅供实验室科研及非临床用途）
实验类型：夹心法
检测范围：0.5 μmol/L – 16 μmol/L
检测限：0.1 μmol/L
应用范围：血清、血浆、组织匀浆、细胞培养物上清或其它相关液体（本产品仅供实验室科研及非临床用途）
小鼠总胆汁酸(TBA)ELISA试剂盒实验目的
本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中小鼠总胆汁酸（TBA）的含量。
有效期：6个月
保存条件：2-8℃
实验原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被小鼠总胆汁酸（TBA）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠总胆汁酸（TBA）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
小鼠总胆汁酸(TBA)ELISA试剂盒组成
| 试剂盒组成 | 96孔配置 | 48孔配置 | 备注 |
|---|---|---|---|
| 微孔酶标板 | 8孔×12条 | 8孔×6条 | 无 |
| 标准品 | 0.3mL×6管 | 0.3mL×6管 | 无 |
| 样本稀释液 | 6mL | 3mL | 无 |
| 检测抗体-HRP | 10mL | 5mL | 无 |
| 20×洗涤缓冲液 | 25mL | 15mL | 按说明书进行稀释 |
| 底物A | 6mL | 3mL | 无 |
| 底物B | 6mL | 3mL | 无 |
| 终止液 | 6mL | 3mL | 无 |
| 封板膜 | 2张 | 2张 | 无 |
| 说明书 | 1份 | 1份 | 无 |
| 自封袋 | 1个 | 1个 | 无 |
备注：
1. 标准品浓度依次为：16、8、4、2、1、0 μmol/L
2. 经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过标准品浓度时，可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。
样本处理及要求
1. 血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 细胞培养物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响*后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
需要而未提供的试剂和器材
1. 酶标仪（450nm）
2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
4. 蒸馏水或去离子水
试剂准备
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。
操作步骤
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3. 样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
原创作者：上海仁捷生物科技有限公司
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