英文名称：Canine Immunoglobulin E,IgE elisa试剂盒

　　规格：48T/96T,可提供定量与定性研究.

　　技术要求： 专业，规范，高效.

　　主要成分：酶标板,试剂,标准品等.

　　检测目的：用于测定血清，血浆及相关液体等样本。例如适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本.

　　试剂盒种属：马铃薯、鹿、羊、鸡、鸭、鱼、人、大鼠、小鼠、豚鼠、仓鼠、裸鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛等动植物。

　　使用我司【犬免疫球蛋白E(IgE)ELISA检测试剂盒】等ELISA试剂盒产品具有以下优点：

　　1、原装进口抗体－－－－高效、灵敏、特异

　　2、规范包被操作－－－－吸附均匀，吸附性好，空白值低，孔底透明度高

　　3、的优化方案－－－－重复性高，可靠性强

　　4、购买本公司的ELISA试剂盒，免费代测

　　5、技术服务要求：专业，规范，高效

　　6、适用于体液、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等多种类型的样本

　　7、可检测动物类型丰富：人、猴、大鼠、小鼠、豚鼠、黄金地鼠、兔、猪、犬、牛、绵羊、山羊、鹅、鸡、虾、河蟹、鲈鱼、斑马鱼等

　　8、可检测指标齐全：炎症因子、血管生成素、动脉粥样硬化因子、趋化因子、生长因子基质金属蛋白酶、脂肪因子等等

注意事项：
1. 间接法测抗体
间接法是检测抗体常用的方法。其原理为利用酶标记的抗抗体(二抗)以检测与固相抗原结合的受检抗体，故称为间接法。操作步骤如下：
1)将特异性抗原与固相载体联结，形成固相抗原，洗涤除去未结合的抗原及杂质。
2)加稀释的样本，保温反应。样本中的特异抗体与固相抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体，样本中的其他成份在洗涤过程中被洗去。
3)加酶标抗抗体。固相免疫复合物中的抗体与酶标抗抗体结合，从而间接地标记上酶。洗涤后，固相载体上的酶量与样本中受检抗体的量正相关。
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定性测定
(1)阳性判定值法(cut-off value，CO值)：一般为阴性对照的平均A值加一个常数，试剂制备严格标准化，要先计算出阳性对照A值平均数和阴性对照A值平均数。标本A值≥CO值即为阳性。
(2)抑制率法：在竞争抑制法中结果可用抑制率表示。
抑制率(％)＝(A阴性对照A- A待测)／阴性对照X100％,一般以抑制率≥50％为阳性
2）半定量测定 结果一般以滴度表示。将标本连续稀释后，进行ELISA检测，在阳性临界值以上的稀释度即为该标本的“滴度”。
3）定量测定 即用己知量的标准品作一系列稀释后进行ELISA测定，与待测标本同时进行测定，绘制标准曲线，结果以绝对量或活性单位表示之。

犬免疫球蛋白E(IgE)ELISA试剂盒 操作流程：
（1）待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔；设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl；另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。
（2）酶标板置4℃，包被过夜。
（3）洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍（将洗涤液注满板孔后，即甩去），之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
（4）阴性对照孔每孔加入PBS 50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。
（5）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。
（6）洗板，同（4）。
（7）每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
（8）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。
（9）洗板，同（4）。
（10）每孔加TMB显色液 100μl，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。
（12）分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，*终测得的OD值为两者之差（W1-W2），以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
（13）数据处理：在得出标本（S）和阴性对照（N）的 OD值后，计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。

 

原创作者：中运智能车辆制造有限公司