还原糖广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。植物体内的还原糖主要包括葡萄糖、果糖和麦芽糖等，是*常见的单糖和双糖，其中葡萄糖和果糖不仅是呼吸作用的主要底物，也是进一步合成蔗糖、淀粉和纤维素的底物。

测定原理：

    加热促进碱性溶液中3,5-二硝基水杨酸溶液与还原糖生成棕红色氨基化合物，在540nm有特征吸收峰；在一定的浓度范围内，还原糖含量与540nm吸光度成线性关系，根据标准曲线，即可求出样品中还原糖的量。

需自备的仪器和用品：

     可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、蒸馏水。

试剂的组成和配制：

试剂一：100mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：35mL×1瓶 ，4℃保存；

标准品：粉剂×1支，4℃保存，含10mg无水葡萄糖（干燥失重<0.2%），临用前加入1ml蒸馏水溶解备用，4℃可保存1周，或者用饱和苯甲酸溶液溶解，可保存更长时间。

标准品准备：将标准品用蒸馏水稀释至0.3、0.25、0.2、0.15、0.1、0.05mg/ml。

样品中还原糖的提取：

1、细菌或细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入2mL提取液的比例超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次）；转移到有盖离心管中（防止加热时水分散失），80℃水浴中40min并且振荡8~10次，离心，取上清供测定用。

2、组织：称取约0.2g样本，加入2mL试剂一匀浆，转移到有盖离心管中（防止加热时水分散失），80℃水浴中40min并且振荡8~10次，8000g，常温离心10min，取上清供测定用。

加样表和测定步骤（在1.5mLEP管中依次加入下列试剂）：

将各管摇匀，在沸水浴中加热5min（盖紧，防止水分散失），取出后立即冷却至室温，混匀。在540nm波长下，用蒸馏水调零，读取标准管、对照管和测定管吸光值。计算ΔA=A 测定-A 对照。

根据标准管浓度和吸光度建立标准曲线，x为吸光度，y为标准品浓度（mg/mL）。

还原糖含量计算：

1、根据标准曲线计算样品中还原糖的含量，即将ΔA（A测定管-A对照管）带入x计算出y值。

2、按样本鲜重计算：

还原糖(μg/g 鲜重)=1000×y×V1÷(W×V1÷V2)=2000×y÷W

3、按样本蛋白浓度计算：

还原糖(μg/mg prot)= 1000×y×V1÷(V1×Cpr)= 1000× y÷Cpr

4、按细菌或细胞密度计算：

还原糖(μg /104 cell)= 1000×y×V1÷（500×V1÷V2）=4×y

1000：1mg/mL=1000μg/mL；V1：加入样本体积，0.7mL；V2：加入试剂一体积，2 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。