动物硬组织高质纯化线粒体分离试剂盒技术背景

线粒体细胞器的分离是现代细胞生物学研究的*常用的手段。从任何组织或细胞分离线粒体的技术方法基本上采用：，通过机械或化学方法破裂细胞；第二，通过低速差速离心去除残渣碎屑和巨大细胞器；第三，通过高速差速离心获得线粒体；甚至，第四，可以通过等密度离心获得纯度更高的线粒体。 

动物硬组织高质纯化线粒体分离试剂盒产品内容

清理液（Reagent A）  毫升

裂解液（Reagent B）  毫升

净化液（Reagent C）  毫升

强化液（Reagent D）  毫升

保存液（Reagent E）  毫升

产品说明书  1份

动物硬组织高质纯化线粒体分离试剂盒用户自备

HANK平衡盐缓冲溶液（GMS12028）或PBS缓冲溶液（GMS12033）：用于清理细胞

胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（GMS12024）：用于细胞脱离

完全细胞培养液（GMS12052）：用于细胞处理所需的培养基

15毫升锥形离心管：用于线粒体初步制备物的存放

50毫升锥形离心管：用于细胞或组织收集后离心或清洗

1.5毫升离心管：用于保存线粒体

4℃台式离心机：用于沉淀细胞

4℃超速离心机：用于分离细胞器成分

DOUNCE匀浆器：用于裂解细胞

动物硬组织高质纯化线粒体分离试剂盒实验步骤

一、 动物软组织线粒体分离（组织匀浆法）

实验开始前，将－20℃冰箱里的净化液（Reagent C）取出冻融，然后移出xx毫升净化液（Reagent C）和xx毫升的裂解液（Reagent B）到15毫升锥形离心管里，混匀后，标记为裂解工作液，放进冰槽里备用。然后进行下列操作。

1． 手术取出动物组织，并秤重以确定1克组织重量（实验前使动物空腹12至24小时） 

2． （选择步骤）放进预冷的50毫升锥形离心管

3． （选择步骤）加入xx毫升清理液（Reagent A）清洗1次

4． 即刻用刀片切碎组织

5． 放进一个预冷的15毫升锥形离心管

6． 加入xx毫升预冷的裂解工作液

7． 涡旋震荡5秒，充分混匀

8． 即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器

9． 在冰槽里用匀浆棒匀化组织（约20至40下）（注意：参见注意事项8）

10． 将所有组织匀浆物移入15毫升锥形离心管

11． 放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1500g

12． 小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管——此步骤去除细胞核和未溶解的细胞

13． 放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为10000g

14． 小心抽去上清液，保留沉淀颗粒——此步骤获得线粒体沉淀物

（注意：如果进行线粒体DNA萃取，直接进入线粒体DNA萃取试剂盒的步骤4，继续下去）

15． （选择步骤）加入xx毫升预冷的保存液（Reagent E）

16． （选择步骤）放进4℃超速离心机再次离心5分钟，速度为10000g

17． （选择步骤）小心抽去上清液

18． 加入xx毫升保存液（Reagent E），充分混匀

19． 即刻移入1.5毫升离心管，放进－70℃冰箱里

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

单组分订购信息

名称规格

动物硬组织高质纯化线粒体分离试剂盒10/50次

清理液（Reagent A）500毫升

裂解液（Reagent B）40毫升

净化液（Reagent C）10毫升

强化液（Reagent D）5毫升

保存液（Reagent E）100毫升

胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液100/500毫升

HANKS平衡盐缓冲溶液500毫升

PBS缓冲溶液500毫升

DMEM完全细胞培养基500毫升

试剂盒订购信息

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