主要用途：冰冻切片线粒体内膜功能/膜电位红色荧光（TMRM）测定试剂盒是一种旨在从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的线粒体细胞器的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适合于动物软组织（肝或脑组织）和培养细胞的线粒体的制备。其制备物产量高，可以被用于细胞凋亡、信号传递、能量代谢、蛋白组学和病理生理学等的研究。产品不含污染性蛋白酶和核酶，即到即用，性能稳定，分离产量和纯度堪称同类产品上乘。

冰冻切片线粒体内膜功能/膜电位红色荧光（TMRM）测定试剂盒技术背景

线粒体细胞器的分离是现代细胞生物学研究的*常用的手段。从任何组织或细胞分离线粒体的技术方法基本上采用：，通过机械或化学方法破裂细胞；第二，通过低速差速离心去除残渣碎屑和巨大细胞器；第三，通过高速差速离心获得线粒体；甚至，第四，可以通过等密度离心获得纯度更高的线粒体。 

冰冻切片线粒体内膜功能/膜电位红色荧光（TMRM）测定试剂盒产品内容

清理液（Reagent A）  毫升

裂解液（Reagent B）  毫升

净化液（Reagent C）  毫升

强化液（Reagent D）  毫升

保存液（Reagent E）  毫升

产品说明书  1份

冰冻切片线粒体内膜功能/膜电位红色荧光（TMRM）测定试剂盒用户自备

HANK平衡盐缓冲溶液（GMS12028）或PBS缓冲溶液（GMS12033）：用于清理细胞

胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（GMS12024）：用于细胞脱离

完全细胞培养液（GMS12052）：用于细胞处理所需的培养基

15毫升锥形离心管：用于线粒体初步制备物的存放

50毫升锥形离心管：用于细胞或组织收集后离心或清洗

1.5毫升离心管：用于保存线粒体

4℃台式离心机：用于沉淀细胞

4℃超速离心机：用于分离细胞器成分

DOUNCE匀浆器：用于裂解细胞

冰冻切片线粒体内膜功能/膜电位红色荧光（TMRM）测定试剂盒实验步骤

一、 动物软组织线粒体分离（组织匀浆法）

实验开始前，将－20℃冰箱里的净化液（Reagent C）取出冻融，然后移出xx毫升净化液（Reagent C）和xx毫升的裂解液（Reagent B）到15毫升锥形离心管里，混匀后，标记为裂解工作液，放进冰槽里备用。然后进行下列操作。

1． 手术取出动物组织，并秤重以确定1克组织重量（实验前使动物空腹12至24小时） 

2． （选择步骤）放进预冷的50毫升锥形离心管

3． （选择步骤）加入xx毫升清理液（Reagent A）清洗1次

4． 即刻用刀片切碎组织

5． 放进一个预冷的15毫升锥形离心管

6． 加入xx毫升预冷的裂解工作液

7． 涡旋震荡5秒，充分混匀

8． 即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器

9． 在冰槽里用匀浆棒匀化组织（约20至40下）（注意：参见注意事项8）

10． 将所有组织匀浆物移入15毫升锥形离心管

11． 放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1500g

12． 小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管——此步骤去除细胞核和未溶解的细胞

13． 放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为10000g

14． 小心抽去上清液，保留沉淀颗粒——此步骤获得线粒体沉淀物

（注意：如果进行线粒体DNA萃取，直接进入线粒体DNA萃取试剂盒的步骤4，继续下去）

15． （选择步骤）加入xx毫升预冷的保存液（Reagent E）

16． （选择步骤）放进4℃超速离心机再次离心5分钟，速度为10000g

17． （选择步骤）小心抽去上清液

18． 加入xx毫升保存液（Reagent E），充分混匀

19． 即刻移入1.5毫升离心管，放进－70℃冰箱里

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

单组分订购信息

名称规格

冰冻切片线粒体内膜功能/膜电位红色荧光（TMRM）测定试剂盒10/50次

清理液（Reagent A）500毫升

裂解液（Reagent B）40毫升

净化液（Reagent C）10毫升

强化液（Reagent D）5毫升

保存液（Reagent E）100毫升

胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液100/500毫升

HANKS平衡盐缓冲溶液500毫升

PBS缓冲溶液500毫升

DMEM完全细胞培养基500毫升

试剂盒订购信息

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