犬肿瘤坏死因子α(TNF-α)elisa试剂盒

英文名称：Canine TNF-α ELISA Kit
实验类型：夹心法
检测范围：2.5 pg/mL – 80 pg/mL
检测限：0.1 pg/mL
应用范围：血清、血浆、组织匀浆、细胞培养物上清或其它相关液体（本产品仅供实验室科研及非临床用途）

犬肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒实验目的

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本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中犬肿瘤坏死因子α（TNF-α）的含量。

有效期：6个月

保存条件：2-8℃

 

 

 

实验原理

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试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被犬肿瘤坏死因子α（TNF-α）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的犬肿瘤坏死因子α（TNF-α）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

 

 

 

犬肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒组成

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试剂盒组成	96孔配置	48孔配置	备注
微孔酶标板	8孔×12条	8孔×6条	无
标准品	0.3mL×6管	0.3mL×6管	无
样本稀释液	6mL	3mL	无
检测抗体-HRP	10mL	5mL	无
20×洗涤缓冲液	25mL	15mL	按说明书进行稀释
底物A	6mL	3mL	无
底物B	6mL	3mL	无
终止液	6mL	3mL	无
封板膜	2张	2张	无
说明书	1份	1份	无
自封袋	1个	1个	无

备注：

1. 标准品浓度依次为：80、40、20、10、5、0 pg/mL

2. 经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过标准品浓度时，可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。

 

 

 

样本处理及要求

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1. 血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2. 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3. 细胞培养物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

注：标本溶血会影响*后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

 

 

 

需要而未提供的试剂和器材

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1. 酶标仪（450nm）

2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温箱

4. 蒸馏水或去离子水

 

 

 

试剂准备

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试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。

20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

 

 

 

操作步骤

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1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3. 样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。