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柠檬酸合酶(CS)测试盒
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详细内容
产品说明: CS(EC 2.3.3.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中,是三羧酸循环第yi个限速酶, 是三羧酸循环主要调控位点之。 CS催化乙酰CoA和草酰乙酸产生柠檬酰辅酶A,进步水解产生柠檬酸;该反应促使DTNB转变成黄色的TNB, 在412nm处有特征吸光值。 注意:实验之建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。 需自备的仪器和用品: 可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、研钵/匀浆器、可调节移液器、1mL
样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、 组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:
1) 称取约 0.1g 组织或收集 500 万细胞,加入 1mL 提取液和 10μL 试剂二,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
2) 将匀浆液 600g,4℃离心 5min。将上清液移至另离心管中,11000g,4℃离心 10min。
3) 上清液即胞浆提取物,可用于测定从线粒体泄漏的 CS。
4) 在沉淀中加入 200μL 试剂和 2μL 试剂二,反复吹打充分混匀,用于 CS 测定,并用于蛋白浓度测定。
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