NADK（EC 2.7.1.23）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是目所发现的生物体内唯能够催 化 NAD+磷酸化生成 NADP +的酶，可催化 NAD(H)以 ATP 或无机多聚磷酸[poly(P)]作为磷酰基供体进行磷酸化反 应，生成 NADP(H)。因此，NAD 激酶在合成 NADP(H)以及调节 NAD(H)与 NADP(H)的平衡上具有重要作用. NADK 催化 NAD+磷酸化，生成 NADP +；NADP +可被 6-磷酸葡萄糖脱氢酶还原为 NADPH；NADPH 通过 PMS 的递氢作用，还原氧化型噻唑蓝（MTT），通过其在 570nm 的吸光值大小可反映出 NADK

注意：实验之建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。


需自备的仪器和用品： 台式离心机、可见分光光度计、水浴锅、1mL 玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、无水乙醇、冰和蒸 馏水。

NADK活性计算


1、标准曲线的绘制： 以 NADP 标准品浓度为 x 轴，ΔA 标准为 y 轴，绘制标准曲线，得到标准曲线 y=kx+b。将ΔA 测定带入公式 得到 x（nmol/mL）。


2、NADK活力的计算： （1）按样本蛋白浓度计算： 单位的定义：每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟产生 1nmol NADP 定义为个酶活力单位。 NADK（U/mg prot）=x×V 样本÷（Cpr×V 样本）÷T=0.067×x÷Cpr （2）按样本质量计算： 单位的定义：每 g 组织在反应体系中每分钟产生 1nmol NADP 定义为个酶活力单位。 NADK（U/g 质量）=x×V 样本÷（W×V 样本÷V 提取）÷T =0.067×x÷W （3）按细菌或细胞数量计算： 单位的定义：每 1 万个细菌或细胞在反应体系中每分钟产生 1nmol NADP 定义为个酶活力单位。 NADK（U/10 4 cell）=x×V 样本÷（500×V 样本÷V 提取）÷T = x×1.33×10 -4 （4）按血清（浆）体积计算： 单位的定义：每 mL 血清（浆）在反应体系中每分钟产生 1nmol NADP 定义为个酶活力单位。 NADK（U/mL）=x÷T=0.067×x V 样本：加入样本体积，0.05mL；V 提取：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本 质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万；T：反应时间，15min。