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二胺氧化酶测试盒
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详细内容
产品说明: DAO(EC1.4.3.6)广泛存在于动物(肠粘膜、肺、肝脏、肾脏等)、植物和微生物中。催化多胺氧化为醛,其 活性与核酸和蛋白合成密切相关,能够反映肠道机械屏障的完整性和受损伤程度。 DAO 催化尸胺产生醛和过氧化氢,外源添加过量的辣根过氧化物酶,催化过氧化氢氧化邻联茴香胺生成有色 物质,在 500nm 处有特征吸收峰,通过测定该波长吸光度增加速率,计算 DAO 活性。
注意:实验之建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品: 天平、低温离心机、可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿、蒸馏水、研钵/匀浆器、水浴锅。
注意事项: 1、 如果 OD 值小于 0.01,适当加大提取用样本质量;OD 值大于 0.8,样本可适当稀释,或者减少提取用样本质 量。 2、 样本蛋白质含量需要另外测定
操作步骤: 、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献) 1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行 冰浴匀浆,然后10000g,4℃离心20min,取上清,置冰上待测。 2. 细菌、细胞:按照细胞数量(10 4个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提 取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3,间隔7,总时间3min);然后10000g,4℃,离心10min, 取上清置于冰上待测。 3. 血清等液体:直接测定。 二、测定步骤 1. 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 500nm,蒸馏水调零。
2. 操作表
对照管 测定管
样本(mL) 0.25 0.25
提取液(mL) 0.64 0.54
试剂(mL) 0.01 0.01
试剂二(mL) 0.1 0.1
试剂三(mL) 0.1
混匀,37℃水浴 30min 后于 1mL 玻璃比色皿中测定
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