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蛋白质羰基含量检测试剂盒
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详细内容
测定意义:蛋白质羰基是多种氨基酸在蛋白质的氧化修饰过程中的早期标志,其含量高低表明蛋白质氧化损伤程度的大小,是衡量蛋白质氧化损伤的主要指标。
测定原理:羰基与2,4-二硝基苯肼反应生成红色2,4-二硝基苯腙,在370nm处有特征吸收峰。
实验仪器:天平、恒温水浴锅、低温离心机、漩涡震荡仪、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿和蒸馏水,无水乙醇,乙酸乙酯。
产品说明: 蛋白质羰基是多种氨基酸在蛋白质的氧化修饰过程中的早期标志,其含量高低表明蛋白质氧化损伤程度的大 小,是衡量蛋白质氧化损伤的主要指标。 羰基与 2,4-二硝基苯肼反应生成红色 2,4-二硝基苯腙,在 370nm 处有特征吸收峰。 注意:实验之建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品: 天平、恒温水浴锅、低温离心机、漩涡震荡仪、紫外分光光度计、1 mL 石英比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水、 无水乙醇和乙酸乙酯。
计算公式 1、按蛋白浓度计算: 蛋白质羰基含量(μmol/mg prot)=(OD370 测定管-OD370 对照管)÷(ε×d)×V÷(Cpr×V 样本) =(OD370 测定管-OD370 对照管)÷4.4÷Cpr 2、按样本质量计算: 蛋白质羰基含量(μmol/g 质量)=(OD370 测定管-OD370 对照管)÷(ε×d)×V÷(W×V 样本÷V 提取) =(OD370 测定管-OD370 对照管)÷4÷W ε:蛋白质羰基消光系数,22mL/μmol/cm;d:比色皿光径,1cm;V:加入试剂六体积,1mL;V 样本:加入 样本体积,0.2mL;V 提取:加入提取液及试剂体积,1.1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量, g。
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