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脱氢抗坏血酸(DHA)含量测试盒
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详细内容
操作步骤: 、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献) 称取约0.1g样本,加提取液1mL,冰上充分研磨,16000g 4℃离心20min,取上清液待测。 二、测定步骤 1、 分光光度计预热30min,调节波长到265nm,蒸馏水调零。 2、 试剂在25℃水浴锅中预热30min以上。 3、 标准管:依次在1mL石英比色皿加入100μL标准液、800μL预热的试剂和100μL试剂二,迅速混匀后于265nm 比色,记录10s和130s的吸光值,分别为A1、A2,ΔA标准管=A2-A1。 Solarbio Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd Tel: 400-968-6088 Fax: 010-56371281/82 Http://www.solarbio.com第 2 页,共 2 页 4、 测定管:依次在1mL石英比色皿加入100μL上清液、800μL预热的试剂和100μL试剂二,迅速混匀后于265nm 比色,记录10s和130s的吸光值,分别为A3、A4,ΔA测定管=A4-A3。 三、样本中 DHA 含量计算 1、 按蛋白浓度计算: DHA(μmol/mg prot) =C标准液×(ΔA测定管÷ΔA标准管)÷Cpr=0.5×ΔA测定管÷ΔA标准管÷Cpr 2、 按样本质量计算: DHA(μmol/g 质量) =[C标准液×(ΔA测定管÷ΔA标准管)×V样总]÷W=0.5×ΔA测定管÷ΔA标准管÷W C标准液:DHA浓度,0.5μmol/mL;V样总:上清液总体积,1.0mL;Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL;W: 样本质量,g。
注意事项: 正式实验做1~2个预实验,如果ΔA大于0.5,建议将样本用提取液进行稀释后进行测定。
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