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谷丙转氨酶(GPT)测试盒
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详细内容
测定原理:GPT 催化丙氨酸和α-酮戊二酸发生转氨基反应,生成丙酮酸和谷氨酸;加入2,4-二硝基苯肼溶液,不仅终止上述反应,而且与酮酸中的羰基加成,生成丙酮酸苯腙;苯腙在碱性条件下呈红棕色,可以在505nm 读取吸光值并计算酶活力。
需自备的仪器和用品:可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
产品说明: GPT(EC 2.6.1.2)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化氨基酸和酮酸转氨基反应,在氨基酸 代谢中具有重要作用。此外,哺乳动物肝细胞GPT活性很高,当肝细胞坏死,GPT释放到血液中,血清GPT活性 显著增高。因此,GPT被卫生组织推荐为肝功能损害敏感的检测指标。 GPT催化丙氨酸和α-酮戊二酸发生转氨基反应,生成丙酮酸和谷氨酸;加入2,4-二硝基苯肼溶液,不仅终止上 述反应,而且与酮酸中的羰基加成,生成丙酮酸苯腙;苯腙在碱性条件下呈红棕色,可以在505nm读取吸光值并 计算酶活力。
注意:实验之建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品: 可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
实验实例: 1、 取 0.1g 兔子肝脏组织加入 1mL 提取液进行匀浆研磨,取上清后再按照测定步骤操作,测得 A 测定管=1.181, A 对照管=0.458,计算∆A =A 测定管-A 对照管=1.181-0.458=0.723,带入标准曲线 y=0.5286x+0.0362,计算 x= (0.723-0.0362)÷0.5286=1.299,按样本质量计算酶活得: GPT(U/g 质量)=12x÷W=12×1.299÷0.1=155.88 U/g 质量。 2、 取兔血清直接检测,测得 A 测定管=0.514,A 对照管=0.383,计算∆A=A 测定管-A 对照管=0.514-0.383=0.131, 带入标准曲线 y=0.5286x+0.0362,x=(0.131-0.0362)÷0.5286=0.179,按血清(浆)体积计算酶活得: GPT(U/mL)=12x=12×0.179=2.148 U/mL
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