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技术文章
如何配置TTC染色液(2%)
点击次数:1148 发布时间:2017/9/12 16:29:32
中文名:TTC染色
原 理:脂溶性光敏感复合物
作 用:检测种子的生存能力
TC染色是TTC和活细胞线粒体内的琥珀酸脱氢酶反应,生成红色的甲臜,用来表示细胞的活力。配制多为2%,染色要避光,37度条件下,它是评价脑缺血损伤常用的指标。
TTC染色:
1原理:TTC(2,3,5—氯化三苯基四氮唑)是脂溶性光敏感复合物,1894年首次合成用来检测种子的生存能力,1958年开始用来染色检测哺乳动物组织的缺血梗塞。它是呼吸链中吡啶—核苷结构酶系统的质子受体,与正常组织中的脱氢酶反应而呈红色,而缺血组织内脱氢酶活性下降,不能反应,故不会产生变化呈苍白。
2 取脑:可麻醉后直接取脑或经生理盐水灌注后取脑。因为脑组织未用多聚甲醛固定,所以较软,取脑时更应仔细,保持大脑的完整性。
3 -20度冰箱中速冻20分钟左右,便于切片。
4 切片:一般切成5-6片,每隔2mm切一片。刀在脑前极与视交叉连线中点处;第二刀在视交叉部位;第三刀在漏斗柄部位;第四刀在漏斗柄与后叶尾极之间。(参考:张均田,主编。现代药理试验方法)。如果需计算面积的话,应切得均匀或用专门的脑槽。
5将切片置于TTC中,常规浓度为2%,也有用1%或更低浓度的。
6用锡箔纸盖住后,放入37C温箱15~30min,不时翻动脑片,使均匀接触到染色液。也可以用将脑片放入多孔板,再滴入TTC,覆以圆形盖玻片使均匀染色。
7 染色后效果:为皮层下梗死。
注意事项:
1、 Leagene TTC Stain(2%) 对人体有轻微刺激性,请注意小心防护。
2、 取脑时应仔细保持大脑的完整性。
3、 如果染色效果不佳,应适当延长染色时间。
4、 样本越新鲜越好,为了防止正常心肌及脑组织的酶活性减弱或消失,应尽快染色。
原创作者:上海岑特生物科技有限公司