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上海岑特生物科技有限公司 主营产品:ELISA试剂盒,质粒定制,各种动物血清,酶联免疫试剂盒,白介素试剂盒,标准品对照品,培养基,抗体,细胞株,微生物,染色液溶液,实验耗材

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技术文章

如何配置TTC染色液(2%)

点击次数:1148 发布时间:2017/9/12 16:29:32

如何配置TTC染色液(2%)

    中文名:TTC染色

    原    理:脂溶性光敏感复合物

    作    用:检测种子的生存能力

    TC染色是TTC和活细胞线粒体内的琥珀酸脱氢酶反应,生成红色的甲臜,用来表示细胞的活力。配制多为2%,染色要避光,37度条件下,它是评价脑缺血损伤常用的指标。


    TTC染色:

    1原理:TTC(2,3,5—氯化三苯基四氮唑)是脂溶性光敏感复合物,1894年首次合成用来检测种子的生存能力,1958年开始用来染色检测哺乳动物组织的缺血梗塞。它是呼吸链中吡啶—核苷结构酶系统的质子受体,与正常组织中的脱氢酶反应而呈红色,而缺血组织内脱氢酶活性下降,不能反应,故不会产生变化呈苍白。

    2 取脑:可麻醉后直接取脑或经生理盐水灌注后取脑。因为脑组织未用多聚甲醛固定,所以较软,取脑时更应仔细,保持大脑的完整性。

    3 -20度冰箱中速冻20分钟左右,便于切片。

    4 切片:一般切成5-6片,每隔2mm切一片。刀在脑前极与视交叉连线中点处;第二刀在视交叉部位;第三刀在漏斗柄部位;第四刀在漏斗柄与后叶尾极之间。(参考:张均田,主编。现代药理试验方法)。如果需计算面积的话,应切得均匀或用专门的脑槽。

    5将切片置于TTC中,常规浓度为2%,也有用1%或更低浓度的。

    6用锡箔纸盖住后,放入37C温箱15~30min,不时翻动脑片,使均匀接触到染色液。也可以用将脑片放入多孔板,再滴入TTC,覆以圆形盖玻片使均匀染色。

    7 染色后效果:为皮层下梗死。

    注意事项:

     1、 Leagene TTC Stain(2%) 对人体有轻微刺激性,请注意小心防护。

    2、 取脑时应仔细保持大脑的完整性。

    3、 如果染色效果不佳,应适当延长染色时间。

    4、 样本越新鲜越好,为了防止正常心肌及脑组织的酶活性减弱或消失,应尽快染色。

原创作者:上海岑特生物科技有限公司

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