菌种代号的意义

国内常见微生物检验所用的菌种代号是CMCC（F）或 CMCC（B）

CMCC －－ 中国医学菌种保藏中心

B －－ 代表细菌， F －－代表真菌。

大肠杆菌[CMCC (B) 44102]；

乙型副伤寒沙门杆菌[CMCC (B) 50094]；

铜绿假单胞菌[CMCC (B)10104]；

金黄色葡萄球菌[CMCC (B)26003]；

生孢梭菌[CMCC(B)64941]；

白色念珠菌[CMCC(F)98001]。

常用菌种保藏方法

(一) 菌种保藏的原理

根据微生物的菌种生理、生化特性，在人工创造的条件下尽量降低微生物细胞的代谢强度，使细胞基本处于休眠状态，生长繁殖受到抑制但又不至于死亡，以减低菌种的变异率。低温、干燥、缺氧、缺乏营养等环境条件都有抑制微生物的代谢作用。

低温、干燥、真空是用于菌种保藏的重要手段。

选择保藏方法时，首先应考虑方法能否长期地保持菌种原有的特性，同时也应兼顾到方法的经济和简便。在实际工作中，往往多种条件同时使用，以提高保藏效果。

（二）菌种保藏步骤

① 挑选特征典型的纯菌菌落；

② 确定保藏的合适菌体形态；

③ 选择*适宜的保藏方法；

④ 定期对保藏菌种进行检查，观察是否发生变化，若有变化，须改变保藏方法。保藏期满应及时进行移种。

1.琼脂斜面低温保存法

（1）方法：将经常使用的菌种的典型菌落接种在斜面（某些特殊菌种可用液体培养基）上，按规定的温度和时间培养，待充分生长后，把培养好的新鲜菌种用牛皮纸保好，为减缓培养基的水分蒸发，延长保藏时间，可将菌种保藏管的棉花塞换成橡胶塞。放在4℃左右的冰箱中保藏。每隔 2~3个月移种一次，继续进行保藏。若用半固体高层培养基穿刺培养，一般可保藏半年 ~ 一年。有的甚至更长时间。

（2）适用范围：细菌、酵母菌、霉菌保藏。

（3）特点：优点是－－简便，易于推广；一般不需要另选择保藏用培养基；对大多数微生物都适用；缺点是－－保藏期太短；传代次数多，易发生变异及污染。

（4）注意事项：保藏的菌种应是生命活力旺盛的新鲜培养物，至少应是第三代的培养物。

保藏时，破伤风杆菌可用庖肉培养基；生孢梭菌用流体硫乙醇酸盐培养基。必须定期检查保藏菌种冰箱的温度、湿度以及菌种管的棉塞是否松动或生霉，如有异常应及时处理。

每次移植后，应与原菌种的编号、名称逐一核对，确证培养基特征和纯度无误后再继续保藏。

保藏菌种的培养基应无糖，其他菌类含糖小于2%为宜，以免产酸过多，影响菌种存活。

铜绿假单胞菌在冰箱中易发生菌体自溶而死亡，不宜用本法保存。

2. 液体石蜡保存法

本法是用石蜡将培养物与空气隔绝，以降低菌种的生理生化水平，并可防止水分蒸发，从而延长菌种的保藏期。

（1）方法：将菌种接种于斜面或穿刺于0.3~0.5 %琼脂半固体高层培养基中，培养好备用。取化学纯的液体石蜡装在试管中，每管10~15mL，加棉塞，瓶口包上纸，121℃高压灭菌30min，取出置37℃温箱或110~170℃烤箱中1~2h或干燥器内除去液体石蜡中的水分。

将上述液体石蜡加入培养好的菌种试管内，液体石蜡液面以高出培养基*上端1㎝为宜，将试管直立，放入4℃冰箱中保藏。

（2）适用范围：适用于保藏部分霉菌，酵母菌和放线菌，对细菌保藏效果较差。

（3）特点：本方法简便易行，是实验室常用的一种保藏方法，该法主要使菌种与空气隔绝。

（4）注意事项：

① 保藏时，用新鲜培养物接种，应检查纯度和特征后，方可进行保藏；

② 保藏过程中，需经常观察斜面是否干燥，如干燥， 需重新移种；

③ 使用菌种时，先将菌种管倾斜使液体石蜡流至一边，再用接种针挑取培养物接种到新鲜斜面上培养，待长出新培养物后，再移种一次到新斜面上即可使用；

④ 将沾有少量液体石蜡的接种针浸于95%酒精中片刻，再烧灼灭菌，以免直接在酒精灯下烧灼时，液体石蜡四溅，引起污染；

⑤ 液体石蜡在菌种管中高出培养基的高度要严格控制，如太多，会影响菌种交换气体，使保藏效果不好；如太少,斜面容易干燥，将缩短保藏期。一般以高出斜面1cm为宜；

⑥ 制备无菌液体石蜡时，每管装量不能太多,否则分装到菌种培养基中易造成污染。

菌种的复苏与保存

菌种的复苏与保存应在专用超净工作台或生物安全柜内进行。

原创作者：上海岑特生物科技有限公司