高-效液相色谱是色谱法的一个重要分支。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科域中重要的分离分析技术。

鉴于HPLC在全行业运用越来越广泛，因此每一个实验室分析人员都应该熟练掌握并应用HPLC，对于一些常见的故障分析应该做到游刃有余，才能在运行故障的时候即使解决问题，提高工作效率。为此小编整理了常见HPLC故障及对策分析方案，不要错过哦。

1、保留时间发生漂移或快速变化原因？

关于漂移问题：

① 温度控制不好，解决方法是采用恒温装置， 保持柱温恒定；

② 流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等 ；

③ 柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡。

关于快速变化问题

① 流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定；

② 泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出；

③ 流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合。

2、出现拖尾或双峰的原因？

① 筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子；

② 存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子；改换流动相或更换选择性好的柱子 ；

③ 可能柱超载，减少进样量。

3、HPLC柱验收测试时柱压过高为什么？

柱压过高是HPLC柱用户蕞常碰到的问题。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因。

① 拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保 护柱的问题，若柱压仍高，再检查；

② 把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降， 否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查；

③ 将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池）。这时，如果柱压仍不下降，再检查；只用于使用过的柱子。

④ 更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高，请与厂商联系。

4、为何出现鬼峰？

①进样阀残余峰－－每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗；

②样品中未知物－－处理样品；

③柱未平衡－－重新平衡柱,用流动相作样品溶剂（尤其是离子对色谱）；

④三氟yi酸（TFA）氧化－－每天新配,用抗氧化剂 ；

⑤水污染（反相）－－通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC的水 。

5、为何出现峰拖尾？

①柱超载——降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相 ；

②峰干扰——清洁样品,调整流动相；

③硅羟基作用——加三乙胺,用碱致钝化柱,增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值,纯化样品 ；

④柱内烧结不锈钢失效——更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品 ；

⑤柱塌陷或形成短路通道——更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件；

⑥死体积或柱外体积过大——连接点降至蕞低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管 ；

⑦柱效下降——用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱。

6、除了流速外，还有哪些因素能引起压力改变？

改变流动相组成和温度；改变柱长、柱内径和填料粒度；柱突然阻塞压力升高（正常情况下其它条件不变柱压都是逐渐升高的）。

7、怎样才会使峰位发生重排？

在分析多组分样品时，仅改变流动相的强度（组成百分比）而不改变其组成，一般仅仅改变所有组分的保留时间，不会发生峰位的重排。

下列条件改变可能发生峰位重排：流动相中换了强溶剂；PH值的改变；柱填料的改变；柱温的改变；流动相的组成改变（如加入离子对试剂三乙基胺等）。

8、除了在线脱气，常用的实验室脱气方式还有哪些？

加热回流脱气，脱气效果蕞佳，但无法保持；氦脱气，此方法脱气效果佳，能除去百分之九十以上的空气，但氦气价格太贵，所以用的不多；真空脱气，效果仅次于氦脱气，但脱气过程中容易造成样品溶液挥发损失；超声脱气，只能脱去约百分之三十的空气，但在实验室中蕞常用。目还是尽量争取用在线脱气，方便且效果好。

原创作者：上海岑特生物科技有限公司