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细胞解冻后缺少活力，活细胞占比较低解决方案
点击次数：141 发布时间：2024/5/17 14:30:07
细胞冻存是细胞保存的主要方法。利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存，可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，这样在需要的时候再复苏细胞用于实验，而且适度地保存一定量的细胞，可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种，起到了细胞保种的作用。
为什么细胞解冻后缺少活力，活细胞占比较低？这种现象可能主要由以下几种原因所导致：
1）培养物冻存液等质量欠缺
解决方案
a.确保用来制备储存物（冻存液）的起始培养物需要保/证其健康、无微生物污染、处于生长对数期后期状态。
b.收获细胞时需要小心翼翼，避免细胞损伤。
2）储存物冻存方法不当
解决方案
a.在液氮冷冻细胞时，确保细胞、培养基和其他试剂的浓度，以及冻存实验步骤依照供应商的建议。一般来说，冻存应该缓慢，大约1-3°C/min以减少冰晶形成。
b.使用电子可编程或机械冷冻装置以确保一致的、适当速率的冷冻。
c.选择合适的细胞冷冻保护剂。如果使用甘油，不要将其存储在光照下，因为曝光会使甘油转化为有对细胞毒性的丙/烯醛。
3）储存物保存不当
解决方案
a.储存物应时刻保持在-130℃，理想情况是置于液氮中，以确保较大的细胞活性。
b.如果将细胞直接浸入液氮中，容易造成液氮泄露到冻存管内，解冻时会有冻存管爆炸的风险。所以一般储存在液氮上方的气相环境中。
4）细胞解冻方法不当
解决方案
a.一般来说，细胞应该快速解冻、使用预热的培养基、尽快移除含有冷冻保护剂的培养基防止细胞活力下降。
b.确保小心操作细胞。不要涡旋或高速离心，因为低温保存后的特别容易受到损伤。
原创作者：上海岑特生物科技有限公司
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