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上海岑特生物科技有限公司 主营产品:ELISA试剂盒,质粒定制,各种动物血清,酶联免疫试剂盒,白介素试剂盒,标准品对照品,培养基,抗体,细胞株,微生物,染色液溶液,实验耗材

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技术文章

培养基的配制原理与操作步骤

点击次数:16 发布时间:2024/6/17 10:19:05

   培养基的配制原理

  
  按照微生物生长的营养需求及其相互比例配制的。
  
  一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)、维生素和水等几大类物质,培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质,也是细胞生长和繁殖的生存环境,培养基种类很多。
  
  根据配制原料的来源可分为自然培养基、合成培养基、半合成培养基;根据物理状态可分为固体培养基、液体培养基、半固体培养基;根据培养功能可分为基础培养基、选择培养基、加富培养基、鉴别培养基等。


  
  配制培养基的步骤
  
  1、配制溶液
  
  向容器内加入所需水量的一部分,按照培养基的配方,称取各种原料,依次加入使其溶解,/后补足所需水分。对蛋白胨、肉膏等物质,需加热溶解,加热过程所蒸发的水分,应在全部原料溶解后加水补足。
  
  配制固体培养基时,先将上述已配好的液体培养基煮沸,再将称好的琼脂加入,继续加热至完/全融化。并不断搅拌,以免琼脂糊底烧焦。
  
  2、调节pH值
  
  用pH试纸(或pH电位计、氢离子浓度比色计)测试培养基的pH值,如不符合需要,可用10%HCl或10%NaOH进行调节,直到调节到配方要求的pH值为止。
  
  3、过滤
  
  用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤。用纱布过滤时,/好折叠成六层,用滤纸过滤时,可将滤纸折叠成瓦棱形,铺在漏斗上过滤。
  
  4、分装
  
  已过滤的培养基应进行分装。如果要制作斜面培养基,须将培养基分装于试管中。如果要制作平板培养基或液体、半固体培养基,则须将培养基分装于锥形瓶内。
  
  分装时,一手捏松弹簧夹,使培养基流出,另一只手握住几支试管或锥形瓶,依次接取培养基。分装时,注意不要使培养基粘附管口或瓶口,以免浸湿棉塞引起杂菌污染。
  
  装入试管的培养基量,视试管和锥形瓶的大小及需要而定。一般制作斜面培养基时,每只15×150毫米的试管,约装3~4毫升(1/4~1/3试管高度),如制作深层培养基,每只20×220毫米的试管约装12~15毫升。每只锥形瓶装入的培养基,一般以其容积的一半为宜。
  
  5、加棉塞
  
  分装完毕后,需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是过滤空气,避免污染。棉塞应采用普通新鲜、干燥的棉花制作,不要用脱脂棉,以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。
  
  制作棉塞时,要根据棉塞大小将棉花铺展成适当厚度,揪取手掌心大小一块,铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中,用右手食指插入棉花中部,同时左手食指与姆指稍稍紧握,就会形成1个长棒形的棉塞。
  
  棉塞作成后,应迅速塞入管口或瓶口中,棉塞应紧贴内壁不留缝隙,以防空气中微生物沿皱折侵入。棉塞不要过紧过松,塞好后,以手提棉塞、管、瓶不下落为合适。棉塞的2/3应在管内或瓶内,上端露出少许棉花便于拔取。塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札,准备灭菌。
  
  6、制作斜面培养基和平板培养基
  
  培养基灭菌后,如制作斜面培养基和平板培养基,须趁培养基未凝固时进行。
  
  (1)制作斜面培养基。在实验台上放1支长0.5~1米左右的木条,厚度为1厘米左右。将试管头部枕在木条上,使管内培养基自然倾斜,凝固后即成斜面培养基。
  
  (2)制作平板培养基。将刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上,点燃酒精灯,右手托起锥形瓶瓶底,左手拔下棉塞,将瓶口在酒精灯上稍加灼烧,左手打开培养皿盖,右手迅速将培养基倒入培养皿中,每皿约倒入10毫升,以铺满皿底为度。
  
  铺放培养基后放置15分钟左右,待培养基凝固后,再5个培养皿一叠,倒置过来,平放在恒温箱里,24小时后检查,如培养基未长杂菌,即可用来培养微生物。

原创作者:上海岑特生物科技有限公司

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