TLC纯度的鉴定：

1 展开溶剂的选择，不只是至少需要3种不同性展开系统展开，是先要选择三种分子间作用力不同的溶剂系统，如lv仿\甲醇，环己/烷\乙酸乙酯，正丁/醇\醋酸\水，分别展开来确定组分是否为单一斑点。这样做的好处是很明显的，通过组份间的各种差别将组分分开，有可能几个相似组份在一种溶剂系统中是单一斑点，因为该溶剂系统与这几个组分的分子间力作用无显著的差别，不足以在TLC区分。而换了分子间作用力不同的另一溶剂系统，就有可能分开。这是用3种不同性展开系统展开所不能达到的。

2 对于一种溶剂系统正如wxw0825所言，至少需要3种不同性展开系统展开，其一种性的展开系统将目标组分的Rf推至0.5，另两性的展开系统将目标组分的Rf推至0.8，0.2。作用是检查有没有性比目标组分更大或更小的杂质。

3 显色方法，光展开是不够的，还要用各种显色方法。一般一定要使用通用型显色剂，如10%硫酸，碘，因为每种显色剂（不论是通用型显色剂，还是属显色剂在工作中都遇到他们都有一化合物不显色的时候），再根据组分可能含有混杂组份的情况，选用属显色剂。只有在多个显色剂下均为单一斑点，这时才能下结论样品为薄层纯

熔程判断纯度：

原理很简单，纯化合物，熔程很短，1，2度。混合物熔点下降，熔程变长。

HPLC的纯度鉴定：

对于HPLC因为常用的系统较少，加之其分离效果好，一般不要求选择三种分子间作用力不同的溶剂系统，只要求选这三种不同性的溶剂系统，使目标峰在不同的保留时间出峰。

软电离质谱的纯度鉴定：

如ESI-MS，APCI-MS。大性化合物选用ESI-MS，性很小的化合物选用APCI-MS，这些软电离质谱的特点是只给出化合物的准分子离子峰，通过正负离子的相互沟通来确定分子量。如果样品不纯，就会检出多对准分子离子峰，不但确定了纯度，还能明确混杂物的分子量。

核磁共振的纯度鉴定：

从氢谱中如果发现有很多积分不到一的小峰，就有可能是样品是样品中的杂质。利用门控去偶的技术通过对碳谱的定量也能实现纯度鉴定。

每种方法多有各自的局限性，如基于氢谱的纯度鉴定，如果发现有很多积分不到一的小峰，还有可能使样品中的活泼质子，基于软电离质谱的纯度鉴定，如果混杂物的分子量与目标物一样就无法检出。

对化合物纯度，上不存在100%纯的化合物。希望要多高的纯度应该与目的有关，例如，想测核磁共振鉴定结构，一般要求95%的纯度，如果想测EI-MS，纯度越高越好。99%以上。

以上的方法都不能区分对应异构体。

原创作者：上海岑特生物科技有限公司