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植物过氧化物酶(POD)提取试剂实验步骤
点击次数: 93发布时间:2011/3/7
资料简介: 中文名称:植物过氧化物酶(POD)提取试剂
储存条件:4℃,12个月
产品规格:500ml
产品用途:植物过氧化物酶(POD)提取液主要用于裂解植物组织,提取植物样品中的过氧化物酶。该试剂仅用于科研域,不宜用于临床诊断或其他用途
产品简介:过氧化物酶(peroxisome,POD)是以过氧化氢为电子受体催化底物氧化的酶,主要存在于细胞的过氧化物酶体中,以铁卟啉为辅基,可催化过氧化氢,氧化酚类和胺类化合物,具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。该酶属于细胞木质素合成途径中间的关键酶,研究该酶可以探讨多种生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机理,为减少水果石细胞含量提高其品质提供依据。
试剂:
(1)0.1%愈创木酚
(2)0.18% H2O2:取30%H2O2 3ml,蒸馏水定量至500ml
(3)标准母液:吸取 5% K2Cr2O7 1.2ml和纯化的10%Co(NO3)2 溶液50ml,混合后加蒸馏水稀释7倍,即为每毫升相当于6.75μg四邻甲氧基苯酚标准母液
方法步骤:
(1)标准曲线的制作:取20ml具塞试管6支,编号,按下表配制四邻甲氧基苯酚标准系列溶液,混匀后以1号管调零,于470 nm波长下测定吸光度,以标准液浓度为横坐标,吸光度为纵坐标绘制标准曲线。或用计算器求出吸光度(Y)随标准液浓度(X)变化的线性回归方程。
2)POD的提取:取待测植物样品(如叶片等),剪碎混匀,称取0.5〜1.0 g于研钵中,加少量 石英砂、CaC03和适量蒸馏水,冰浴研磨匀浆,蒸馏水定至50 mL,摇匀后离心,上清液即为待测酶液。
(3)POD活性测定:取20mL具塞试管6支,3支测定(3个重复),3支空白对照。各加入酶液1.0 mL,0.1%愈创木酚1.0 mL,蒸馏水6.9 mL,摇匀,加入0.18% H202 1.0 mL(空白管不加,多加1.0mL蒸馏水),摇匀(计时),25℃下准确反应10 min,加5%偏磷酸0.2 mL终止反应。用标准曲线1号管调零,于分光光度计上测定3支测定管和空白对照管的A470。
计算公式
式中,X为测定管四邻甲氧基苯酚的含量(mg);X0为对照四邻甲氧基苯酚的含量(μg);Vt为酶液总体积(mL);FW为样品鲜重(g);Vs为测定时取酶液的量(mL);t为酶作用的时间(min)。
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