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上海岑特生物科技有限公司 主营产品:ELISA试剂盒,质粒定制,各种动物血清,酶联免疫试剂盒,白介素试剂盒,标准品对照品,培养基,抗体,细胞株,微生物,染色液溶液,实验耗材

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资料下载

改良柠檬酸钠抗原修复液(50×)用途

点击次数: 37发布时间:2011/3/7

  • 上 传 者: 上海古朵生物科技有限公司
  • 上传时间: 2021/11/23 15:25:55
  • 文件大小: 14KB
  • 文件类型: docx
  • 所属分类: 应用方法
  • 下载次数: 4次
  • 查看次数: 37

资料简介:

产品名称:改良柠檬酸钠抗原修复液(50×)
英文名称 : Sodium Citrate Antigen Retrieval Solution,50×
规    格:100ml
用    途:用于石蜡切片、冰冻切片等样品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后的抗原修复。
注意事项:常用的抗原修复液,主要由柠檬酸钠、EDTA组成
储存条件:4℃,12个月

简介:
细胞或组织用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后,会导致细胞内抗原形成醛键、羧甲键而被封闭了部分抗原决定簇,同时蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽,导致免疫染色时染色信号减弱,甚至出现一些假阴性染色结果。所以要求在进行免疫组化染色时,需要行抗原修复或暴露,即将固定时分子之间所形成的交联破坏,而恢复抗原的原有空间形态。从而提高抗原的检出率,降低背景染色,提高检测的准确性。

柠檬酸钠抗原修复液(Citrate Antigen Retrieval solution,50×)是一种常用的抗原修复液,可以用于石蜡切片、冰冻切片等样品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后的抗原修复。可以有效去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联,充分暴露石蜡切片等样品中的抗原表位,从而大大改善免疫染色效果。

通常石蜡切片都需进行抗原修复处理,而冰冻切片可以不进行抗原修复处理。抗原修复可以提高石蜡切片的免疫染色效果,亦可以不同程度的提高冰冻切片的染色效果。当冰冻切片免疫染色效果不理想时,考虑进行抗原修复。

按照每个片子需要10ml抗原修复液(1×)计算,100ml抗原修复液(50×)可以用于500个样本的抗原修复。

自备材料:
1、系列乙醇
2、双蒸水或去离子水
3、加热设备
4、免疫染色洗涤液

操作步骤(仅供参考):
(一)石蜡切片
1、脱蜡至水
①二甲苯3次,每次3~5min。
②无水乙醇脱水2次,每次3~5min。
③95%的乙醇,3~5min。
④90%的乙醇,3~5min。
⑤80%的乙醇,3~5min。
⑥70%的乙醇,3~5min。
⑦蒸馏水冲洗2次,每次3~5min。

2、抗原修复
①用去离子水或双蒸水稀释CitrateAntigenRetrievalsolution(50×)至1×。
②将切片浸泡在抗原修复液(1×)中,95℃或沸水加热约10~30min。
③抗原修复液(1×)使用需预热到95~100℃。如果使用微波炉加热,避免暴沸和过多的水分蒸发。随后大约在20~30min内冷却至室温。

3、免疫染色洗涤液洗涤1~2次,每次3~5min。4、进行封闭等后续的免疫染色步骤。

(二)冰冻切片
1、用去离子水或双蒸水稀释CitrateAntigenRetrievalsolution(50×)至1×。
2、免疫染色洗涤液洗涤切片5min。
3、将切片浸泡在抗原修复液(1×)中,95℃或沸水加热约10~30min
4、抗原修复液(1×)使用预热至95~100℃。如果使用微波炉加热,避免暴沸和过多的水分蒸发。随后大约在20~30min内冷却至室温。
5、免疫染色洗涤液洗涤1~2次,每次3~5min。
6、进行封闭等后续的免疫染色步骤。

(三)其它样品其它样品参考石蜡切片或冰冻切片进行操作。

注意事项:
1、浸泡在抗原修复液(1×)中,佳的加热时间需根据不同的样品和目的蛋白自行摸索。
2、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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