人本周蛋白(BJP)ELISA试剂盒实验原理_资料下载

本试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)来检测样品的浓度。往预先包被捕获抗体的包被微孔中,依次加入样本、HRP标记的检测抗体,经过温育并洗涤。再用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅与检测样品中检测物的浓度呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中检测物的含量。

试剂盒组成：

1、30倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 6ml×1瓶

2、酶标试剂 6ml×1瓶 8 标准品(240 ng/L) 0.5ml×1瓶

3、酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶

试验所需自备物品

1.酶标仪(450nm波长滤光片)

2.高精度移液器,EP管及一次性吸头

3.37°C恒温箱,双蒸水或去离子水

4.吸水纸

操作步骤

1.标准品的加样:设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;。2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40Щ,然后再加待测样品10u(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,3.加酶:每孔加入酶标试剂100u,空白孔除外,

4.温育:用封板膜封板后罟37”C温育60分钟,

5.配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用,

6.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30后弃去,如此重复5次,拍干.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50m,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟8.终止:每孔加终止液50m,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

9.测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行

人本周蛋白(BJP)ELISA试剂盒

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