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人chemerin ELISA试剂盒操作步骤
点击次数: 13发布时间:2011/3/7
资料简介: 产品名称:人Chemerin(RARRES2)ELISA试剂盒 组分 规格 数量 预包被抗人Chemerin抗体的96孔板 96T 1板 重组人Chemerin标准品(冻干) 50ng/管 2管 生物素标记抗人Chemerin(100X) 130μl 1管 亲和素-过氧化物酶复合物(ABC)(100X) 130μl 1管 样品稀释液 30ml 1瓶 抗体稀释液 12ml 1瓶 ABC稀释液 12ml 1瓶 TMB显色液 10ml 1瓶 TMB终止液 10ml 1瓶 洗涤缓冲液(25X) 20ml 1瓶 封板膜 4张 浓度(ng/ml) 0 0.78 1.56 3.12 6.25 12.5 25 50 OD值 0.008 0.349 0.577 0.854 1.079 1.315 1.459 1.639 操作步骤 以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
英文名称:Human Retinoic acid receptor responder protein 2 ELISA Kit
产品规格:96T
本试剂盒采用夹心法酶联免疫吸附法,用于体外定量分析人血清、血浆、细胞裂解液或细胞培养上清中Chemerin的含量。预先包被的抗体和检测相抗体都是Chemerin多克隆抗体。检测抗体经生物素标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后,PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应;经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的Chemerin呈正相关。
Chemerin也称TIG2或RARRES2,分子量为18KD。Chemerin基因在体内可以表达出一种具有低活性的复合蛋白,即体prochemerin,经细胞外蛋白酶水解作用,prochemerin可以转变为具有高活性的chemerin蛋白。Chemerin主要表达在白色脂肪组织、肝、卵巢等组织中。
检测指标:Retinoic acid receptor responder protein 2;RARRES2;Chemerin;Tazarotene-induced gene 2 protein;TIG2
检测范围:780pg/ml~50ng/ml
特异性:系统与其他细胞因子无交叉反应
敏感性:<5pg/ml
产品组成:
储存条件:2-8℃(频繁使用时),-20℃(长时间不用时)。
有效期:6个月(4℃);12个月(-20℃)。
参考标准曲线数据:(取自某一批次质检数据,仅供参考,用户需要自己建立标准曲线)
1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照随货说明书中图表在小试管中进行稀释。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.
10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
计算
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