岑特古朵生物科技公司是国内elisa试剂盒优质供应商，代理销售不同ELISA试剂盒品牌的进口/国产elisa试剂盒，专业供应科研实验所需的培养基，抗体，动物血清血浆，标准品对照品" >标准品对照品，化学试剂，酶联免疫试剂盒，白介素试剂盒，金标检测试剂盒，微生物，蛋白质，ELISA种属涵盖广，凭借多年行业经验，完善的售后服务，高质量的产品。欢迎来电咨询。

    广州客户通过阿仪网成功订购岑特古朵 大鼠ELISA试剂盒：

    酶联免疫吸附实验材料，试剂，溶液

    1.酶标板，100μltip头，1ml Ep管，湿盒

    2.包被稀释液（0.05mol/L碳酸钠-碳酸氢钠buffer,pH 9.6）

    碳酸钠0.15g,碳酸氢钠0.29g,叠氮钠0.02g,加双蒸水至100ml,调至pH     9.6

    3.  封闭液（5%小牛血清/PBS溶液）

    小牛血清5ml, 1*PBS（pH 7.4）95ml

    4.  洗涤液（PBST, pH 7.4）

    NaCl 0.8g, KH2PO40.02g,Na2HPO4.12H2O 0.29g, KCl 0.02g,Tween20 0.05ml,叠氮钠0.01g,加双蒸水至100ml,调至pH 7.4

    5.  样本稀释液（PBS, pH 7.4）

    NaCl 0.8g, KH2PO40.02g,Na2HPO4.12H2O 0.29g, KCl 0.02g,叠氮钠0.01g,加双蒸水至100ml,调至pH 7.4

    6.  酶标第2抗体（羊抗兔）稀释范围1:5,000-1:100,000

    7.  底物液（TMB-过氧化氢尿素溶液）

    ① 底物液A:TMB20mg,无水乙醇10ml,加双蒸水至100ml.

    ②底物液B（0.1mol/L柠檬酸-0.2mol/L磷酸二氢钠缓冲液， pH 5.0-5.4）

    Na2HPO41.46g, 柠檬酸0.933g, 0.75%过氧化氢尿素0.64ml, 加三蒸水至100ml,调至pH 5.0-5.4

    ③底物A和B按1:1混合即成TMB-过氧化氢尿素溶液。

    8. 终止液（2mol/LH2SO4溶液）双蒸水200ml,浓硫酸34ml,（缓慢滴加并不断搅拌），加双蒸水至300ml

    9. 0.9%生理盐水

    操作步骤：

    1.     包被过程（注意设置空白对照，阴性对照）：

    将所用抗原用包被稀释液稀释到适当浓度（一般所需抗原包被量为每孔20-200μg），每孔抗原加入100μl, 置37℃，4h,或4℃，24h;弃去孔中液体。（为避免蒸发，板上应加盖或将板平放在底部有湿纱布的金属湿盒中）

    2.     封闭酶标反应孔：

    5%小牛血清置37℃封闭40min.封闭时将封闭液加满各反应孔，并去除各孔中的气泡，封闭结束后用洗涤液满孔洗涤3遍，每遍3min.

    洗涤方法：吸干孔内反应液，将洗涤液注满板孔，放置2min略作摇动，吸干孔内液，倾去液体后在吸水纸上拍干

    洗涤次数3次

    3.     加入待检测样品（建立合适的浓度梯度）：

    检测时一般采用1:50-1:400的稀释度， 应采用较大稀释体积进行，一般保证样品吸取量>20μl.

    将稀释好的样品加入酶标反应孔中，每样品至少加双孔， 每孔100μl,置于37℃，40-60min.用洗涤液满孔洗涤3遍，每遍3min.

    4.     加入酶标抗体：

    酶标抗体： 根据酶结合物提供商提供的参考工作稀释度进行。 37℃，30-60min之间。短于30min往往结果不稳定。每孔加100μl.洗涤同前。

    5.     加入底物液（现用现配）：

    TMB-过氧化氢尿素溶液，OPD-过氧化氢底物液系统次之。

    底物加入量：每孔100μl,置37℃避光放置3-5分钟，加入终止液显色。

    6.     终止反应：

    每孔加入终止液50μl终止反应，于20min内测定实验结果。

    7.     结果判断：

    OPD显色后采用492nm波长，TMB反应产物检测需要450nm波长。检测时一定要首行空白孔系统调零。用测定标本孔的吸收值与一组阴性标本测定孔平均值的比值（P/N）表示，当P/N大于2时作为抗体的效价。（数值的大小依具体检测要求而定。）

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