表 1. 直接法与间接法的比较 直接检测法中，标记物通过共价键直接连接到一抗上。而对于间接检测法，标记物则是共价连接到与一抗特异性结合的二抗上。间接法检测包括两步：步，用未标记的一抗进行孵育，抗体与抗原结合（若存在抗原），洗去未结合的抗体（一般 3～5 次），第二步则是加入标记二抗孵育（通常 1 小时），洗涤去掉未结合的二抗，然后量化结合在一抗上的标记物。在直接法中，标记物直接与一抗共价结合，因此仅需与含有抗原的样本孵育这一步骤，而且只需一次洗涤，而间接法则需要两轮孵育与洗涤步骤。直接法简化了试验的流程，降低了试验的变异性，增加了数据的可靠性。然而一抗的共价修饰可以导致抗体亲和力的改变，这种情况的出现与标记二抗带来的非特异性结合的问题相比而言，显得无关紧要。下表列举出了直接法与间接法的主要优缺点比较。