过氧化物酶

 

　　过氧化物酶广泛分布于植物中，辣根中含量高，从辣根中提取的称辣根过氧化物酶（HRP），是由无色酶蛋白和深棕色的铁卟啉构成的一种糖蛋白（含糖量18%），分子量约40 000，约由300个氨基酸组成，等电点为pH 3-9，催化反应的适pH值因供氢体不同而稍有差异，一般多在pH 5左右。此酶溶于水和50%饱和度以下的硫酸铵溶液。酶蛋白和辅基的大吸收光谱分别为275nm和403nm。

 

　　酶的纯度以RZ表示：RZ=OD403/OD275

 

　　纯酶的RZ多在3.0以上，高为3.4。RZ在0.6以下的酶制品为粗酶，非酶蛋白约占 75%，不能用于标记。RZ在2.5以上者方可用于标记。HRP的作用底物为过氧化氢，催化反应时的供氢体有几种：（1）邻苯二胺（OPD），产物为橙色，可溶性，敏感性高，大吸收值在490nm，可用肉眼观察判别，容易被浓H2SO4终止反应，颜色可在数小时内不改变,是目国内ELISA中常用的一种；（2）联大茴香胺（OD）,产物为橘黄色，大吸收值在400nm，颜色较稳定；（3）5－氨基水杨酸（5－AS）：产物为深棕色，大吸收值在449nm，部分溶解，敏感性较差；（4）邻联甲苯胺（OT）产物为蓝色，大吸收值在630nm，部分溶解，不稳定，不耐酸，但反应快，颜色明显。

 

　　碱性磷酸酶

 

　　系从小牛肠粘膜和大肠杆菌中提取，由多个同功酶组成。它们的底物种类很多，常用者为硝基苯磷酸盐，廉价无毒性。酶解产物呈黄色，可溶，大吸收值在400nm。酶的活性以在pH10反应系统中，37℃1分钟水解1μg磷酸苯二钠为一个单位。