产品名称：防御素β103A(DEFb103A)重组蛋白
来源：重组蛋白
宿主：E.coli
产品规格：10μg   50μg   200μg   1mg   5mg
内毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法测定)具体详见说明书
片段与标签：Tyr191~Glu412 with N-terminal His Tag
物种来源（人、小鼠、大鼠、豚鼠、兔、猕猴、山羊、绵羊、马、牛、猪、鸡、狗等其他物种多物种）相同的名称，不同的物种。
性状：冻干粉
表达系统：大肠杆菌
产品纯度：>95%-98%（SDS-PAGE & RP-HPLC）
储存方式：如果样品在2-4周内使用，可以在4°C低温储存。
长期储存，建议添加载体蛋白（0.1％HSA或BSA），并储存在-20~ -80°C。避免多次冻融。
 产品用途 ：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB
用法：Reconstitute in 100mM NaHCO3, 500mM NaCl (pH8.3) to a concentration of 0.1-1.0 mg/mL. Do not vortex.

 

A、核蛋白表达系统以大肠杆菌表达系统为代表，具有遗传背景清楚、成本低、表达量高和表达产物分离纯化相对简单等优点，缺点主要是蛋白质翻译后缺乏加工机制，如二硫键的形成、蛋白糖基化和正确折叠，得到具有生物活性的蛋白的几率较小，查看原核蛋白表达实验案例。

B、酵母蛋白表达系统以甲醇酵母为代表，具有表达量高，可诱导，糖基化机制接近高等真核生物，分泌蛋白易纯化，易实现高密发酵等优点。缺点为部分蛋白产物易降解，表达量不可控，查看酵母蛋白表达实验案例。

C、杆状病毒-昆虫细胞表达系统凭借高特异性高表达水平及翻译后修饰功能，被用作种表达大规模蛋白的强有力的工具系统，相对来说，操作流程较多，成本偏高。查看杆状病毒表达系统案例

D、哺乳动物细胞蛋白表达服务和昆虫细胞表达系统主要优点是蛋白翻译后加工机制接近体内的天然形式，容易保留生物活性，缺点是表达量通常较低，稳定细胞系建立技术难度大，生产成本高。查看哺乳动物表达系统案例。

表达出来的蛋白比实际大小要小，这是为什么？主要原因有如下几个方面：

1. 蛋白本身被降解了，可以存在些不利于该蛋白稳定的蛋白酶。

2. 翻译起始位点的问题：如果个类似于核糖体结合位点(AAGGAGG)的序列加上适当的间隔序列出现在了ATG密码子上游，降解就会有可能出现。解决的方法可以采用两端都带有融合标签的载体，例如pET系列部分载体在N-端和C-端都有His-Tag融合标签。这样，全长蛋白就可以通过提高咪唑浓度，在洗脱时将截短蛋白与全长蛋白区分开。或者在蛋白两端采用不同标签，进而通过亲和纯化的方式得到全长蛋白。

3. 影响蛋白稳定性的另外个因素是与N端Met相邻的氨基酸，即N端原则，当下列氨基酸出现在N端时: Arg、 Lys、Phe、Leu、Trp和Tyr 蛋白的半衰期较短，蛋白会存在不稳定降解的问题，特别是Leu，当它出现在第二个位置上时，蛋白度不稳定。在选择克隆位点时， Nco I 和Nde I都是 是个比较好的N端的克隆位点选择，而使用NdeI的时候就要特别留意Leu的出现。


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