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NAD激酶(NADK)测试盒 微量法
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详细内容
测定方法:微量法
测定规格:管/48样
保存条件:低温避光保存
有 效 期:6个月
注 意 :正式测定之选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
样本测定的准备:
1、细菌、细胞或组织样品的制备:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~0:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。
活性计算:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、血清(浆)NADK活力的计算:
单位的定义:每mL血清(浆)每分钟生成1 nmol的NADP定义为一个酶活力单位。
NADK(nmol/min/mL)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷V样÷T=53.59×ΔA
2、组织、细菌或细胞中NADK活力的计算:
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每mg组织蛋白每分钟生成1 nmol NADP定义为一个酶活力单位。
NADK(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=53.59×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每g组织每分钟生成1 nmol NADP定义为一个酶活力单位。
NADK(nmol/min /g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W× V样÷V样总) ÷T=53.59×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟生成1 nmol NADP定义为一个酶活力单位。
NADK(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V样÷V样总) ÷T=0.107×ΔA
V反总:反应体系总体积,1×10-4 L;ε:NADPH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.02 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,15 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。
本产品仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用。
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