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SP Sepharose HP,SP琼脂糖凝胶HP
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详细内容
产品名称:SP琼脂糖凝胶HP
英文名字:SP Sepharose HP
供应商:上海岑特
适用范围:利用离子交换作用,应用于蛋白等生物分子的精细纯化等
性 状:白色微球,凝胶状,保存在20%酒精溶液中
凝胶类型:离子交换填料,强酸型
结构成分:6%交联琼脂糖
工作PH值:3-14
操作温度:4-40℃
储存方式:4℃
产品规格:25毫升/瓶,100毫升/瓶,500毫升/瓶
SP Sepharose HP,SP琼脂糖凝胶HP 层析原理:
凝胶过滤--------依赖于分子的大小和形状
吸附层析-----依赖于被分离化合物与凝胶之间的氢键数量和质量
分配层析----------------依赖于被分离化合物在流动相(溶剂)和固定相(凝胶)之间的分配,这主要由样品的极性和溶剂的极性决定的。
SP Sepharose HP,SP琼脂糖凝胶HP 使用方法分类:
1.乙醇浸泡:在室温下,将干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小时,并不断搅拌以保证凝胶溶胀,用无盐水洗去残存的乙醇滤干;
2.无盐水浸泡:室温下,在无盐水中充分溶胀24小时,间隙搅拌,以保证凝胶的完全溶胀,然后;
3.盐酸浸泡:在常温下再用0.2NHCl浸泡12小时,间隙搅拌,滤干,水洗只中性;
4.将溶胀好的凝胶脱气后(真空抽滤或超声波)根据装柱要求一次性置入柱内,注意保持湿态装柱,并避免柱内产生气泡或断层;
5.上样前平衡层析柱至少3-5个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止(流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值);
6.凝胶过滤的上样量一般为5%的柱床体积,我们建议初次上样控制在1-2%的床体积,视分离情况可以调整;脱盐时上样量可以达到20%的柱床体积,柱高的选择也与分离要求相关,柱高控制在40-50cm以下,过高的凝胶层会引起较大的反压,应当尽可能避免。难分离物质要有一定柱高和流速控制,脱盐时高径比为5:1即可;
7.洗脱方法:可以用无盐水,也可以采用上柱时的缓冲液洗脱;在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以完全分离纯化;
8.在位清洗(CIP)凝胶使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。方法是以
40cm/h用1M氢氧化钠反向洗四个柱体积,再以至少三个柱体积平衡缓冲液再生。
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