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DEAE-琼脂糖凝胶FF使用方法
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详细内容
品 名:DEAE-琼脂糖凝胶FF
产品规格:20 ml,100 ml,1L,1 ml预装柱,5 ml预装柱,10 ml预装柱
储存方式:2~8℃冰箱保存。
保质期:5年。
DEAE-琼脂糖凝胶FF使用方法 相关介绍:
DEAE-琼脂糖凝胶FF是一种将三甲胺基烷基季铵基键合在琼脂糖凝胶微球上形成的带有强碱阴离子基团的层析分离介质。该产品保留了琼脂糖极好的亲水性及大网架结构,与生物活性大分子有很好的相容性,具有离子交换容量高、非特异性吸附少、流速快等特点,广泛用于蛋白质、核酸、多肽及多糖等生物大分子的实验室规模制备和生物制药、生物工程的工业化制备。
DEAE-琼脂糖凝胶FF使用方法 满足标准:
DEAE-琼脂糖凝胶FF DEAE-Sepharose FF层析原理:
凝胶过滤--------依赖于分子的大小和形状
吸附层析-----依赖于被分离化合物与凝胶之间的氢键数量和质量
分配层析----------------依赖于被分离化合物在流动相(溶剂)和固定相(凝胶)之间的分配,这主要由样品的极性和溶剂的极性决定的。
DEAE-琼脂糖凝胶FF 使用方法:
1. 装柱
1.1 根据分离目标的性质配制初始缓冲液(平衡液)和洗脱缓冲液。
1.2 将凝胶抽干,并用蒸馏水洗涤2次去除保存时的乙醇,按凝胶: 初始缓冲液=3:1的比例配成匀浆并脱气。
1.3 将层析柱垂直固定,底端用水或缓冲液润湿并保持一段液位。
1.4 用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,使凝胶在柱内自由沉降。
1.5 连结好柱子顶端活动柱头,打开蠕动泵,让缓冲液用操作流速流过5个柱体积,再使用1.5倍的操作流速流过5个柱体积,调节适配柱头,使其尽量贴近胶面,*后用2~3个柱体积的缓冲液平衡柱子。
DEAE-琼脂糖凝胶FF使用方法分类:
1.乙醇浸泡:在室温下,将干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小时,并不断搅拌以保证凝胶溶胀,用无盐水洗去残存的乙醇滤干;
2.无盐水浸泡:室温下,在无盐水中充分溶胀24小时,间隙搅拌,以保证凝胶的完全溶胀,然后;
3.盐酸浸泡:在常温下再用0.2NHCl浸泡12小时,间隙搅拌,滤干,水洗只中性;
4.将溶胀好的凝胶脱气后(真空抽滤或超声波)根据装柱要求一次性置入柱内,注意保持湿态装柱,并避免柱内产生气泡或断层;
5.上样前平衡层析柱至少3-5个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止(流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值);
6.凝胶过滤的上样量一般为5%的柱床体积,我们建议初次上样控制在1-2%的床体积,视分离情况可以调整;脱盐时上样量可以达到20%的柱床体积,柱高的选择也与分离要求相关,柱高控制在40-50cm以下,过高的凝胶层会引起较大的反压,应当尽可能避免。难分离物质要有一定柱高和流速控制,脱盐时高径比为5:1即可;
7.洗脱方法:可以用无盐水,也可以采用上柱时的缓冲液洗脱;在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以完全分离纯化;
8.在位清洗(CIP)凝胶使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。方法是以40cm/h用1M氢氧化钠反向洗四个柱体积,再以至少三个柱体积平衡缓冲液再生。
DEAE-琼脂糖凝胶FF使用方法 相关信息:
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人N端中段骨钙素(N-MID-OT)ELISA试剂盒96T/48T
人骨保护素配体(OPGL)ELISA试剂盒96T/48T
CAS:99353-00-1 迷迭香酸甲酯 Methylrosmarinate
CAS:464-98-2 (3BETA,18ALPHA,19ALPHA)-乌苏-20-烯-3-醇
CAS:483-66-9 6-甲氧基当归素
CAS:183626-28-0 (3AR,7AS)-六氢-3A-羟基-6(2H)-苯并呋喃酮 CleroindicinC
CAS:559-70-6 beta-Amyrin人骨粘连蛋白(ON)ELISA试剂盒96T/48T
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CAS:482-27-9 Isopimpinellin
CAS:56317-15-8 5,6,7,8-四甲氧基香豆素 5,6,7,8-Tetramethoxycoumarin
CAS:1059-14-9 Taraxasterol
CAS:624-45-3 乙酰丙酸甲酯 Methyllevulinate
CAS:1188282-01-0 16-O-Acetyldarutigenol
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