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人可溶性核因子κB受体活化因子配基(sRANKL)ELISA试剂盒说明书
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详细内容
名称:人可溶性核因子κB受体活化因子配基(sRANKL)ELISA试剂盒
英文名:Human soluble receptor activator of nuclear factor-kB ligand,sRANKL ELISA Kit
参数规格:48T/96T
样本:血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。
产品特点:敏感性高、特异性强、重复性好、试剂稳定、易保存,操作简便。
产品用途:用于测定血清,血浆及相关液体样本中相关含量或活性。
种属:人、大鼠、小鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛、羊、鸡、鸭、鱼等。
人可溶性核因子κB受体活化因子配基(sRANKL)ELISA试剂盒说明书 操作步骤:
1. 取出试剂盒,于室温(20-25℃)放置15-30分钟。实验过程应在室温(20-25℃)内进行。
2. 取出酶标板,按照标准品的次序分别加入50μl的标准品溶液于空白微孔中。
3. 空白微孔中加入50μl的样品,空白对照加入50μl的蒸馏水;
4. 在样品孔中加入10μl的生物素;(不含空白对照孔,切忌:生物素只加样品孔!)
5. 在各孔中加入100μl的酶标记溶液;(不含空白对照孔)
6. 将酶标板用封口胶密封后,37℃孵育反应 1小时;(在孵育箱中保持稳定的温度与湿度)
7. 充分清洗酶标板3-5次,保持各孔有充足的水压;(浓缩洗涤液以1:100的比例与蒸馏水稀释)
8. 酶标板洗涤后用吸水纸彻底拍干;
9. 各孔加入显色剂A、B液各50μl;(不含空白对照孔)
10. 20-25℃下避光反应15分钟;
11.各孔加入50μl终止液,终止反应;
人可溶性核因子κB受体活化因子配基(sRANKL)ELISA试剂盒说明书 操作注意事项:
1)试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
2)实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
3)不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4)使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
5)使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6)洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7)底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8)加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9)按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
人可溶性核因子κB受体活化因子配基(sRANKL)ELISA试剂盒说明书 样本处理及要求:
1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
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