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三聚氰胺快速检测试剂盒操作步骤
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详细内容
名称:三聚氰胺快速检测试剂盒
供应商:岑特生物
产地:国产|进口
检测样本:乳制品、组织、饲料
检测方法: 酶联免疫法
检测限: 0.1ppb/0.05ppb
产品规格:96T×1/盒
保质期:12个月
储藏:于2~8℃避光保存。
三聚氰胺快速检测试剂盒操作步骤【测定原理】
三聚氰胺试剂盒采用间接竞争ELISA方法,在酶标板的微孔条上预包被偶联抗原,当样品加入到各个微孔中后,样品中残留的三聚氰胺和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗三聚氰胺抗体,加入酶标二抗后,用TMB底物显色,样本吸光值与其残留物三聚氰胺的含量成负相关,与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数,即可得出样品中三聚氰胺的含量。
使用三聚氰胺试剂盒通过酶联免疫吸附试验方法测定三聚氰胺的含量时,*后进行结果分析时,通常采用的都是定量分析方法,从而得到每一份牛奶样品中含有三聚氰胺的具体数值,具有较高的准确度和可靠性。
三聚氰胺试剂盒检测是一种敏感性高、特异性强、重复性好的检测方法,具有操作简便、分析速度快、灵敏度高、样品容量大、样品前处理简单、仪器化成本低和分析成本低等优点,是目前*理想的残留筛选性分析方法 。
步骤
三聚氰胺试剂盒定量测定三聚氰胺残留。先将三聚氰胺酶标记物,样品及标准加入到已经包被有三聚氰胺抗体的微孔中开始反应。在30min的孵育过程中,样品中的三聚氰胺与三聚氰胺酶标记物竞争结合微孔中的三聚氰胺 抗体,孵育30min后洗掉小孔中所有没有结合的三聚氰胺及三聚氰胺酶标记物。在配制的洗液清洗结束后,每孔中加入清澈的底物溶液,结合的酶标记物将无色的底物转化为蓝色的物质。孵育30min后加入终止液(盐酸),终止底物反应,在450nm波长检测吸光度值。根据各孔颜色深浅进行数据读取。依据标准的吸光度值得出样品中三聚氰胺的的浓度值 。
注意事项
试剂盒选择
在实际检测中发现,一般在试剂盒说明书中列出以下指标:检测限;回收率;交叉反应率;标准曲线图谱及数据,标准曲线至少由5个浓度组成;IC50测定值及变形曲线点数目,是比较规范的试剂盒,可以选择。
试剂盒保存
试剂盒通常是在2~8℃的条件下保存,不要冷冻,使用前将试剂盒从冰箱中取出于室温条件下回温,待回温至室温后方可使用,试剂盒在室温条件下放置时间不要超过24h,所以应将没有使用完的试剂盒及时地放回冰箱中保存,将不用的酶标板微孔条放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下。另外,不要使用过了有效日期的试剂盒,也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂,掺杂使用过了有效期的试剂盒会导致灵敏度的降低,同样地,不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
检测时注意事项
(1)室温及试剂盒的温度条件
室温及试剂盒的温度条件室温在25℃左右,试剂盒应提前从冰箱中取出于室温条件下回温,待回温至室温后方可使用。若室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温(20~25℃)会导致所有标准的吸光值(OD值)偏低。
(2)加样
先加标准品或样本置相对应的微孔中,注意每加一个标准品或样本必须更换吸头;再加入后面的各试剂时,吸头不能靠在板孔壁上,要悬空加入,以防止交叉污染;吸取各试剂或样本时,注意准确性,防止少加、漏加而影响测定结果。
(3)洗板
无洗板机时建议使用多孔加样器或多孔洗涤瓶,观察吸头是否安装牢固,以确保每孔加入的洗涤工作液相同;同样地,加洗涤液时吸头不能靠在板孔壁上,要悬空加入,以防止交叉污染;不要漏洗板孔。整个操作过程不要让板孔干燥,洗板后应立即进行下一步操作,不要中断实验去从事其他事情,因为在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况,则会出现标准曲线不成线性、重复性不好的现象,所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。此步的操作关系到测定结果的准确度和重复性。
(4)显色
在显色反应过程中,由于板孔中含有两种或两种以上试剂,所以加样完成后需在桌上做圆周运动以混匀,混匀时要注意防止孔内的液体溅出。在加入底物液A和底物液B后,显色了规定的时间后,若颜色较浅,可以适当地延长显色反应时间,但延长时间不得过长,一般不超过10min
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