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技术文章
鱼组胺(HIS)ELISA试剂盒操作步骤
点击次数：6759 发布时间：2019/12/25 16:03:32
鱼组胺(HIS)elisa试剂盒操作步骤
1. 标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品*终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 加酶：每孔加入酶标试剂100μl，空白孔除外。
4. 温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟。
5. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。
6. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
7. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
8. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
9. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
样品活化方法
生物样品中的通常以无活性的形式存在，在检测指标活性前必须进行活化处理。
活化方法如下：
血清、血浆： 280 μL标准品&样品稀释液中加入40 μL样品，混匀，加入40 μL活化试剂1，室温孵育10分钟。再加入40 μL活化试剂2，混匀后立即检测。
注意：样品被稀释了10倍！
细胞培养上清：20 μL标准品&样品稀释液中加入100 μL样品，混匀，加入40 μL活化试剂1，室温孵育10分钟。再加入40 μL活化试剂2，混匀后立即检测。
注意：样品被稀释了2倍！
组织匀浆：1960 μL标准品&样品稀释液中加入40 μL样品，混匀后检测。
注意：样品被稀释了50倍！
原创作者：上海谷研实业有限公司
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